副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是海產(chǎn)品主要病原菌之一,食用被該菌污染的海產(chǎn)品可引起腸胃炎、發(fā)燒等癥狀,嚴(yán)重影響人類健康。為了探索在室溫條件下控制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的有效方法,本研究以Vp為宿主菌,從揚州市污水中分離出5株裂解性噬菌體,并研究了其生物學(xué)特性、噬菌體殺菌劑的制作及其在生物防治方面的應(yīng)用,為開發(fā)新型Vp殺菌劑奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:(1)從揚州市污水中分離出30株Vp噬菌體,篩選出裂解性好的5株噬菌體進行后續(xù)研究。透射電鏡觀察其形態(tài)有長尾噬菌體科、肌尾噬菌體科、蓋噬菌體科。噬菌體在60℃及pH 4～10條件下活性穩(wěn)定。裂解譜實驗結(jié)果顯示VppYZU81裂解譜最寬,能裂解25株宿主菌;5株噬菌體制成的VppMIX能裂解43株宿主菌。一步生長曲線和最佳感染復(fù)數(shù)的研究表明了噬菌體裂解性的差異性。(2)對5株噬菌體的全基因組進行了測序,結(jié)果顯示,5株Vp噬菌體均為新的噬菌體。噬菌體 VppYZU64、VppYZU68、VppYZU81、VppYZU92、VppYZU110 基因組全長分別為 76,153 bp、58,495 bp、42,897 ...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
第一章 緒論
    1 三文魚及其概況
    2 副溶血性弧菌
        2.1 副溶血性弧菌及危害
        2.2 副溶血性弧菌的耐藥性
        2.3 副溶血性弧菌的防治及存在的問題
    3 噬菌體
        3.1 噬菌體的生物學(xué)特性
        3.2 噬菌體基因組學(xué)的研究現(xiàn)狀
        3.3 噬菌體安全性的研究現(xiàn)狀
        3.4 噬菌體治療優(yōu)勢及目前存在的問題
            3.4.1 噬菌體治療具有以下優(yōu)勢
            3.4.2 噬菌體治療存在的問題
        3.5 噬菌體的應(yīng)用
            3.5.1 噬菌體在農(nóng)業(yè)中應(yīng)用
            3.5.2 噬菌體在檢測中應(yīng)用
            3.5.3 噬菌體在食品中的應(yīng)用
            3.5.4 副溶血性弧菌噬菌體的應(yīng)用
    4 檸檬酸在食品中的應(yīng)用
    5 研究目的及意義
第二章 副溶血性弧菌噬菌體的分離
    1 材料與方法
        1.1 樣品來源
        1.2 菌株來源
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 培養(yǎng)基與溶液配制
        1.6 方法
            1.6.1 噬菌體的分離
            1.6.2 噬菌體的純化
            1.6.3 噬菌體的增殖
            1.6.4 噬菌體效價的測定
            1.6.5 噬菌體的保存
            1.6.6 噬菌體的電鏡觀察
            1.6.7 噬菌體裂解譜的測定
            1.6.8 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)的測定
            1.6.9 噬菌體一步生長曲線的測定
            1.6.10 噬菌體的熱穩(wěn)定性實驗
            1.6.11 噬菌體的pH穩(wěn)定性實驗
    2 結(jié)果
        2.1 噬菌體的分離純化
        2.2 噬菌體的效價
        2.3 噬菌體的微觀形態(tài)
        2.4 噬菌體裂解譜的測定
        2.5 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)
        2.6 噬菌體的一步生長曲線
        2.7 噬菌體熱穩(wěn)定性
        2.8 噬菌體pH穩(wěn)定性
    3 本章小結(jié)
第三章 5株噬菌體全基因組測序及生物信息學(xué)分析
    1 材料與方法
        1.1 宿主菌
        1.2 噬菌體
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器與設(shè)備
        1.5 培養(yǎng)基與溶液配制
        1.6 方法
            1.6.1 噬菌體粗顆粒的提取
            1.6.2 噬菌體基因組DNA提取
            1.6.3 噬菌體基因組DNA序列的測定
    2 結(jié)果
        2.1 噬菌體DNA樣品檢測
        2.2 噬菌體基因組組分構(gòu)成
        2.3 噬菌體全基因組圖譜
        2.4 噬菌體基因功能分析
        2.5 噬菌體基因組安全性評估
    3 本章小結(jié)
第四章 噬菌體聯(lián)合檸檬酸對Vp的抑制作用研究
    1 材料與方法
        1.1 菌株來源
        1.2 噬菌體來源
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 培養(yǎng)基與溶液配制
        1.6 方法
            1.6.1 培養(yǎng)基中不同濃度檸檬酸pH測定
            1.6.2 VPYZU64在酸化培養(yǎng)基中生長能力測定
            1.6.3 噬菌體VppYZU64在酸化培養(yǎng)基中的活性
            1.6.4 噬菌體VppYZU64分別與檸檬酸、鹽酸聯(lián)合對宿主菌抑制作用比較
            1.6.5 混合噬菌體與檸檬酸聯(lián)合在培養(yǎng)基中的抑制作用
            1.6.6 三文魚的感官評定
            1.6.7 噬菌體聯(lián)合檸檬酸對三文魚中副溶血性弧菌的抑制作用
            1.6.8 噬菌體VppYZU64對副溶血性弧菌生物膜的去除
            1.6.9 噬菌體聯(lián)合檸檬酸作用對VPYZU64生物膜的影響
            1.6.10 噬菌體聯(lián)合檸檬酸消除生物膜的菌落計數(shù)
            1.6.11 掃描電鏡觀察聯(lián)合作用對生物膜的消除
            1.6.12 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 培養(yǎng)基中不同濃度檸檬酸pH測定
        2.2 VPYZU64在酸化培養(yǎng)基中生長能力測定結(jié)果
        2.3 噬菌體VppYZU64在酸化培養(yǎng)基中的活性
        2.4 噬菌體VppYZU64分別與檸檬酸、鹽酸聯(lián)合對宿主菌抑制作用比較
        2.5 混合噬菌體與檸檬酸聯(lián)合應(yīng)用在培養(yǎng)基中的抑制作用
        2.6 三文魚的感官評價
        2.7 噬菌體聯(lián)合檸檬酸在三文魚基質(zhì)中TAC值變化
        2.8 噬菌體對生物膜的消除情況
        2.9 噬菌體、檸檬酸聯(lián)合作用對生物膜的消除情況
        2.10 噬菌體、檸檬酸聯(lián)合作用消除生物膜的菌落計數(shù)
        2.11 掃描電鏡觀察噬菌體、檸檬酸對生物膜的抑制作用
    3 討論
第五章 噬菌體不敏感突變頻率
    1 材料與設(shè)備
        1.1 宿主菌
        1.2 噬菌體
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 培養(yǎng)基與溶液配制
        1.6 方法
            1.6.1 不敏感突變頻率的測定
            1.6.2 噬菌體對抗性菌落的確定
            1.6.3 抗性菌落的穩(wěn)定性、逆轉(zhuǎn)
            1.6.4 抗性菌落吸附率測定
            1.6.5 抗性菌落的生長曲線及形態(tài)觀察
    2 結(jié)果
        2.1 BIMs頻率測定
        2.2 噬菌體對抗性菌落的確定
        2.3 抗性菌落穩(wěn)定性
        2.4 抗性菌落吸附速率
        2.5 抗性菌落生長曲線及形態(tài)
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間研究成果



本文編號：3808690