淀粉作為我國居民日常米面主食的典型組分,是機體能量攝入的主要來源,其品質(zhì)直接影響著機體健康。通過酶法改性淀粉,可以提升淀粉的抗消化性能,進而提升淀粉的品質(zhì)。糖基轉(zhuǎn)移酶(GTase)具有斷裂α-1,4糖苷鍵、形成其它糖苷鍵的水解轉(zhuǎn)苷催化特性,是增強淀粉抗消化性能的一種重要酶類。本課題用來源于Azotobacter chroococcum ATCC 4412(嗜鉻固氮菌ATCC 4412)的GTase對dian分進行酶法改性,首先GTase的酶學(xué)性質(zhì)和重構(gòu)淀粉鏈的作用機理,接著以麥芽糊精(MD)為底物制備難消化糊精,并對難消化糊精的理化性質(zhì)進行研究,最后對難消化糊精影響Caco-2細(xì)胞吸收轉(zhuǎn)運葡萄糖和腸道益生功能進行評價。首先,通過分子生物學(xué)方法誘導(dǎo)表達(dá)了來源于A.chroococcum ATCC 4412的GTase并研究了其酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明:GTase的最適pH為6.5-7.0,最適溫度為55°C,熱變性溫度為62°C。1 mmol/L的Ca²⁺能使GTase的酶活提高2.44倍。GTase的酶活遵循米氏方程的動力學(xué)行為,催化效率(k_cat...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號說明
1 緒論
    1.1 淀粉改性研究
        1.1.1 淀粉結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 物理改性
        1.1.3 化學(xué)改性
        1.1.4 酶改性
    1.2 GTase的研究
        1.2.1 GTase簡介
        1.2.2 GTase的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 GTase的催化機理
    1.3 膳食纖維的生理功能研究
        1.3.1 調(diào)節(jié)血清中的血脂
        1.3.2 控制血糖濃度
        1.3.3 降低結(jié)腸癌發(fā)病率
        1.3.4 提高免疫調(diào)節(jié)功能
    1.4 課題研究背景及意義
    1.5 課題主要研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 主要材料與試劑
    2.2 主要儀器與設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 重組菌的構(gòu)建
        2.3.2 GTase的制備
        2.3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析和序列對比
        2.3.4 GTase的酶學(xué)性質(zhì)研究
        2.3.5 酶改性對淀粉/麥芽糊精結(jié)構(gòu)特性的影響
        2.3.6 難消化糊精的制備
        2.3.7 難消化糊精的理化性質(zhì)
        2.3.8 難消化糊精對Caco-2細(xì)胞吸收、轉(zhuǎn)運葡萄糖的影響
        2.3.9 難消化糊精的體外模擬發(fā)酵研究
    2.4 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與討論
    3.1 GTase的表達(dá)與純化
    3.2 進化樹與保守序列分析
        3.2.1 進化樹分析
        3.2.2 保守序列分析
    3.3 GTase的酶學(xué)性質(zhì)
        3.3.1 GTase的熱變性溫度研究
        3.3.2 p H對 GTase酶活力的影響
        3.3.3 溫度對GTase酶活力的影響
        3.3.4 金屬離子對GTase酶活力的影響
        3.3.5 GTase的反應(yīng)動力學(xué)研究
    3.4 GTase改性對淀粉/麥芽糊精的影響
        3.4.1 薄層色譜
        3.4.2 GTase改性對淀粉/麥芽糊精相對分子質(zhì)量的影響
        3.4.3 GTase改性對淀粉/麥芽糊精糖苷鍵的影響
        3.4.4 GTase改性對淀粉/麥芽糊精結(jié)構(gòu)的影響
        3.4.5 GTase最適作用底物分析
        3.4.6 GTase重構(gòu)淀粉鏈鍵接方式機理研究
    3.5 難消化糊精的制備
        3.5.1 HPLC監(jiān)測難消化糊精的制備過程
        3.5.2 HPSEC-MALL-RI分析難消化糊精制備過程
        3.5.3 難消化糊精制備過程中結(jié)構(gòu)的變化
        3.5.4 難消化糊精制備過程中消化特性的變化
    3.6 難消化糊精的理化特性
        3.6.1 難消化糊精的粒徑分析
        3.6.2 難消化糊精的流變特性
        3.6.3 難消化糊精的熱力學(xué)特性
        3.6.4 難消化糊精的穩(wěn)定性分析
        3.6.5 難消化糊精的消化動力學(xué)分析
    3.7 難消化糊精對葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運的影響
        3.7.1 難消化糊精的細(xì)胞毒性
        3.7.2 難消化糊精對Caco-2細(xì)胞吸收葡萄糖的影響
        3.7.3 難消化糊精對Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運葡萄糖的影響
        3.7.4 難消化糊精對Caco-2細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運體表達(dá)的影響
    3.8 難消化糊精的體外發(fā)酵分析
        3.8.1 難消化糊精對腸道細(xì)菌增殖和發(fā)酵液pH的分析
        3.8.2 難消化糊精對SCFAs產(chǎn)量的影響
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
文章創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
附錄 Ⅰ
附錄 Ⅱ:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3768623