發(fā)布時間：2023-03-11 18:07

　　食物過敏作為全球公共健康問題,預(yù)防、控制其發(fā)生是食品質(zhì)量與安全把控的首要問題。RBL-2H3細(xì)胞具有與肥大細(xì)胞相似的生物學(xué)特征,細(xì)胞表面可表達(dá)高親和力受體FcεRI,是研究食物過敏的一種常見細(xì)胞模型。蕓香柚皮苷是一種具有抗過敏活性的黃酮類化合物。本文首先采用傳統(tǒng)的RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型,探討蕓香柚皮苷對RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的影響及具體作用機(jī)制;其次,通過構(gòu)建OVA激活的RBL-2H3細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒免疫模型,探討蕓香柚皮苷對RBL-2H3細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒的影響及其作用機(jī)制,旨在進(jìn)一步明確蕓香柚皮苷的抗過敏活性。蕓香柚皮苷對IgE介導(dǎo)的細(xì)胞脫顆粒的影響:基于對RBL-2H3細(xì)胞活力無影響的蕓香柚皮苷濃度,通過ELISA考察蕓香柚皮苷對β-Hex、組胺、IL-4和TNF-α釋放的影響,并結(jié)合AFM對細(xì)胞形態(tài)考察,證實了蕓香柚皮苷對RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒有顯著抑制作用;通過熒光顯微鏡考察RBL-2H3細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度,證實了蕓香柚皮苷對胞內(nèi)鈣離子增加有顯著性抑制作用;通過RT-PCR法考察表面受體FcεRI亞基mRNA的表達(dá),證實了蕓香柚皮苷對RBL-2H3細(xì)胞表面受體FcεR...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞
第1章 緒論
    1.1 食物過敏
        1.1.1 食物過敏現(xiàn)狀
        1.1.2 常見食物過敏原
        1.1.3 食物過敏反應(yīng)機(jī)制
    1.2 肥大細(xì)胞
        1.2.1 肥大細(xì)胞脫顆粒機(jī)制
        1.2.2 常見MC脫顆粒模型
    1.3 天然抗過敏黃酮類小分子化合物
        1.3.1 黃酮類抗過敏化合物
        1.3.2 蕓香柚皮苷
    1.4 本文研究的目的和內(nèi)容
        1.4.1 本文研究的目的與意義
        1.4.2 本文研究的內(nèi)容
第2章 蕓香柚皮苷對Ig E介導(dǎo)的RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒的影響及其作用機(jī)制
    2.1 引言
    2.2 實驗材料、儀器與試劑
        2.2.1 主要實驗儀器
        2.2.2 主要實驗試劑
        2.2.3 主要溶液的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 RBL-2H3細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞活力的測定
        2.3.3 細(xì)胞活化脫顆粒β-Hex的檢測
        2.3.4 細(xì)胞上清液細(xì)胞因子的測定
        2.3.5 原子力顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的變化
        2.3.6 細(xì)胞內(nèi)鈣離子的測定
        2.3.7 mRNA的表達(dá)量的測定
        2.3.8 Western blot分析
    2.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞活力的影響
        2.5.2 蕓香柚皮苷對細(xì)胞脫顆粒釋放β-Hex、組胺、IL-4 和TNF-α的影響
        2.5.3 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒引起的形貌變化的影響
        2.5.4 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響
        2.5.5 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞表面受體(FcεRI)m RNA表達(dá)的影響
        2.5.6 蕓香柚皮苷對IgE介導(dǎo)的RBL-2H3 細(xì)胞信號通路的影響
    2.6 討論
    2.7 小結(jié)
第3章 構(gòu)建OVA激活的RBL-2H3 細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒模型
    3.1 引言
    3.2 實驗材料、儀器與試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 小鼠血清中OVA特異性IgE(sIgE)的測定
        3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)測定RBL-2H3 細(xì)胞與IgE的結(jié)合能力
        3.3.3 RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒實驗
        3.3.4 CCK8 法檢測RBL-2H3 細(xì)胞的細(xì)胞活力
    3.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.5 實驗結(jié)果
        3.5.1 小鼠血清中sIgE的含量
        3.5.2 流式細(xì)胞術(shù)分析RBL-2H3 細(xì)胞與IgE的結(jié)合能力
        3.5.3 RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒能力的分析
        3.5.4 OVA與過敏血清對RBL-2H3 細(xì)胞活力的影響
    3.6 討論
    3.7 小結(jié)
第4章 蕓香柚皮苷對OVA激活的RBL-2H3 細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒的作用機(jī)制
    4.1 引言
    4.2 實驗材料、儀器與試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 OVA激活的RBL-2H3 細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒
        4.3.2 細(xì)胞脫顆粒釋放的細(xì)胞因子測定
        4.3.3 Western blot分析RBL-2H3 細(xì)胞信號通路中相關(guān)蛋白
    4.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    4.5 實驗結(jié)果
        4.5.1 OVA激活的RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒
        4.5.2 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子含量的影響
        4.5.3 蕓香柚皮苷對RBL-2H3 細(xì)胞高反應(yīng)性脫顆粒免疫模型中MAPK、NF-κB和 Lyn激酶信號通路的影響
    4.6 討論
    4.7 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
    5.3 創(chuàng)新性
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介
碩士期間研究成果
致謝



本文編號：3759993