食品安全問題是一個全球性的公共衛(wèi)生安全問題,一直都是社會關(guān)注的焦點,因為這關(guān)系著每個人的切身利益,而其中,由食源性致病菌引起的食品安全問題更是日前人們最為關(guān)注的點。因為食源性致病菌具有很大危害性且很大地影響食品污染,因此,建立快速、便捷、靈敏的食源性致病菌檢測方法對預(yù)防食品安全問題以及保護人類健康問題具有很重要意義。阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）是一種食源性條件致病菌,會引起一系列病癥,其中包括敗血癥、壞死性結(jié)腸炎以及新生兒腦膜炎。該菌可存在于牛奶、蔬菜、肉類和茶等各種食物內(nèi),但嬰幼兒配方奶粉（powdered infant formula,PIF）是其最主要的污染源。由于阪崎腸桿菌對新生兒具有巨大的潛在風險,已被FAO-WHO正式確認為A類病原體。本論文基于阪崎克羅諾桿菌的特異序列及特異性結(jié)構(gòu)構(gòu)建了四種阪崎克羅諾桿菌活菌的快速檢測方法,簡述如下:1)建立了基于逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcriptase–Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）核酶的阪崎克羅諾桿菌活菌的電化學檢測方法。在該研究中,首先對阪崎克... 

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 課題來源
    1.2 課題研究的目的和意義
    1.3 課題研究背景
        1.3.1 阪崎克羅諾桿菌簡介
        1.3.2 阪崎克羅諾桿菌的生理生化特性
        1.3.3 污染源
        1.3.4 阪崎克羅諾桿菌檢測方法的國內(nèi)外概況
        1.3.5 G-四鏈體/hemin核酶
    1.4 活菌檢測技術(shù)研究進展
        1.4.1 檢測靶標的選擇
        1.4.2 DNA結(jié)合染料
        1.4.3 核酸適配體
    1.5 論文的主要研究內(nèi)容
第二章 基于RT-PCR偶聯(lián)DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌活菌的電化學檢測技術(shù)
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 菌株及實驗試劑
        2.2.2 試劑配制
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 阪崎克羅諾桿菌活菌電化學檢測方法
        2.3.2 細菌的培養(yǎng)與計數(shù)
        2.3.3 RNA提取
        2.3.4 引物設(shè)計
        2.3.5 RT-PCR反應(yīng)引物設(shè)計
        2.3.6 電化學檢測
        2.3.7 Hemin濃度的優(yōu)化
        2.3.8 底物的優(yōu)化
        2.3.9 電化學檢測的特異性評價
        2.3.10 電化學檢測的靈敏度測定
        2.3.11 人工污染樣品檢測
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 阪崎克羅諾桿菌電化學檢測方法可行性驗證
        2.4.2 實驗條件的優(yōu)化
        2.4.3 電化學檢測的特異性評價
        2.4.4 電化學檢測的靈敏度測定
        2.4.5 人工污染樣品檢測結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 基于LAMP和PMA的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測技術(shù)
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 菌株及實驗試劑
        3.2.2 試劑配制
        3.2.3 主要儀器設(shè)備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 基于LAMP與PMA的可視化檢測方法原理
        3.3.2 菌液的制備
        3.3.3 菌落裂解
        3.3.4 LAMP引物設(shè)計
        3.3.5 PMA處理
        3.3.6 LAMP反應(yīng)
        3.3.7 實驗條件的優(yōu)化
        3.3.8 基于LAMP-PMA可視化檢測特異性評價
        3.3.9 基于LAMP-PMA可視化檢測靈敏度測定
        3.3.10 人工污染樣品檢測
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 最佳反應(yīng)條件的確定
        3.4.2 基于LAMP-PMA可視化檢測特異性評價
        3.4.3 基于LAMP-PMA可視化檢測靈敏度測定
        3.4.4 人工污染樣品檢測結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 基于RT-PSR的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測技術(shù)
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 菌株及實驗試劑
        4.2.2 試劑配制
        4.2.3 主要儀器設(shè)備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 基于RT-PSR可視化檢測方法原理
        4.3.2 細菌的培養(yǎng)與計數(shù)
        4.3.3 RNA提取
        4.3.4 引物設(shè)計
        4.3.5 可視化檢測
        4.3.6 實驗條件的優(yōu)化
        4.3.7 基于RT-PSR可視化檢測的特異性評價
        4.3.8 基于RT-PSR可視化檢測的靈敏度測定
        4.3.9 人工污染樣品檢測
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 RT-PSR可視化檢測反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        4.4.2 RT-PSR可視化檢測反應(yīng)時間的優(yōu)化
        4.4.3 d NTP濃度的優(yōu)化
        4.4.4 基于RT-PSR可視化檢測特異性評價
        4.4.5 基于RT-PSR可視化檢測靈敏度測定
        4.4.6 人工污染樣品檢測結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 基于適配體偶聯(lián)DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測技術(shù)
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 菌株及實驗試劑
        5.2.2 試劑配制
        5.2.3 主要儀器設(shè)備
    5.3 實驗方法
        5.3.1 基于適配體-DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌無酶可視化檢測原理
        5.3.2 細菌的培養(yǎng)與計數(shù)
        5.3.3 引物設(shè)計
        5.3.4 可視化檢測
        5.3.5 Hemin濃度的優(yōu)化
        5.3.6 溫育溫度的優(yōu)化
        5.3.7 可視化檢測特異性評價
        5.3.8 可視化檢測靈敏度測定
        5.3.9 人工污染樣品檢測
    5.4 結(jié)果和分析
        5.4.1 阪崎克羅諾桿菌可視化檢測可行性分析
        5.4.2 實驗條件的優(yōu)化
        5.4.3 可視化檢測特異性評價
        5.4.4 可視化檢測靈敏度測定
        5.4.5 人工污染樣品檢測結(jié)果
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
作者在攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]2001-2013年中國重大食物中毒事件的分析評價[J]. 杜蘇萍,王敬敬,張昭寰,孫曉紅,潘迎捷,趙勇.  上海海洋大學學報. 2016(02)
[3]阪崎克羅諾桿菌TaqMan-MGB探針實時熒光PCR快速檢測技術(shù)研究[J]. 黃燾,周蒂,王莉萍.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學. 2013(11)
[4]基于rpoB基因的阪崎克羅諾桿菌分子檢測體系的建立及其應(yīng)用[J]. 周勝利,黃佳,晁愛敏,于海燕,顧卿,韓明春,徐杭英,周斌.  安全與環(huán)境學報. 2012(04)
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[6]淺談生物安全實驗室及其在質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]. 姜雯,薛巍,王慶貴.  中國標準化. 2006(09)

碩士論文
[1]基于核酸適配體的赭曲霉毒素A和伏馬毒素B1檢測方法研究[D]. 桂海孌.浙江農(nóng)林大學 2015



本文編號：3669909