脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和可拉酸（Colanic acid,CA）同屬細(xì)胞多糖類物質(zhì),在大腸桿菌中脂多糖是細(xì)胞膜壁的主要組成部分,而可拉酸是分泌到細(xì)胞外的一種陰離子雜多糖。本課題探究了在不同營養(yǎng)條件下脂多糖結(jié)構(gòu)突變對可拉酸合成的影響,初步提出基于脂多糖和可拉酸共享前體物質(zhì)積累的可拉酸分泌模型。主要結(jié)果與結(jié)論如下:（1）當(dāng)野生型MG1655及9株大腸桿菌脂多糖突變株在30℃的富含葡萄糖的M9或LBG中培養(yǎng)時(shí),ΔF、ΔP、ΔG、Δ（L-Q）ΔF、Δ（L-Q）和Δ（L-G）能夠分泌一定量的可拉酸,且Δ（L-Q）和Δ（L-G）表現(xiàn)出較強(qiáng)的可拉酸合成能力。同時(shí)MG1655、Δ（D-Q）、Δ（F-Q）和Δ（C-Q）無明顯可拉酸分泌。同樣地,當(dāng)10株菌在30℃的LB中培養(yǎng)時(shí),10株菌都無明顯的可拉酸分泌。以上實(shí)驗(yàn)說明大腸桿菌中可拉酸的合成與脂多糖結(jié)構(gòu)和細(xì)胞對葡萄糖的利用密切相關(guān)。（2）將野生型MG1655及突變株ΔF、ΔP、Δ（D-Q）、Δ（F-Q）、Δ（C-Q）、Δ（L-Q）ΔF和Δ（L-Q）分別在液體M9及LB中培養(yǎng)至對數(shù)中期,轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果表明,無論菌株是在M9... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 細(xì)菌內(nèi)多糖概述
    1.2 脂多糖核心多糖概述
        1.2.1 脂多糖的組成及其功能
        1.2.2 大腸桿菌K-12菌株核心多糖結(jié)構(gòu)及合成基因簇
    1.3 可拉酸概述
        1.3.1 可拉酸的結(jié)構(gòu)與合成基因簇
        1.3.2 Rcs磷酸轉(zhuǎn)移系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制
    1.4 立題背景與意義
    1.5 課題研究方案與目標(biāo)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 主要引物
        2.1.3 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用試劑和酶
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 分子DNA操作
        2.2.2 大腸桿菌核心多糖敲除突變菌株的構(gòu)建
        2.2.3 脂多糖的提取與鑒定
        2.2.4 M9、LB或 LBG液體培養(yǎng)基中菌株生長曲線測定
        2.2.5 M9、LB、LBG或 M9M固體培養(yǎng)基上胞外多糖的媒染實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 M9、LB、LBG或 M9M液體培養(yǎng)基中可拉酸的定量測定
        2.2.7 β-半乳糖苷酶酶活測定
        2.2.8 細(xì)胞內(nèi)D-6-磷酸葡萄糖的測定
        2.2.9 轉(zhuǎn)錄組樣品的制備與分析
        2.2.10 RT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組結(jié)果
        2.2.11 細(xì)胞外膜滲透性的測定
        2.2.12 藥敏擴(kuò)散試紙實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 細(xì)菌最小抑菌濃度(MIC)的測定
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 大腸桿菌MG1655脂多糖核心多糖突變菌株的構(gòu)建與脂多糖結(jié)構(gòu)驗(yàn)證
        3.1.1 利用CRISPR-Cas9 技術(shù)以MG1655 為出發(fā)菌株構(gòu)建突變菌株
        3.1.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證突變菌株脂多糖結(jié)構(gòu)的改變
    3.2 大腸桿菌脂多糖突變株的構(gòu)建及其在不同生長培養(yǎng)基中的生長比較
    3.3 大腸桿菌脂多糖核心多糖結(jié)構(gòu)改變對可拉酸合成的影響
        3.3.1 脂多糖突變株在M9、LB和 LBG固體培養(yǎng)基中可拉酸合成能力分析
        3.3.2 脂多糖突變株在M9、LB和 LBG液體培養(yǎng)基中可拉酸合成能力分析
        3.3.3 脂多糖突變株在M9M培養(yǎng)基中可拉酸合成能力分析
    3.4 在M9和LB培養(yǎng)基中脂多糖核心多糖突變株的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
        3.4.1 轉(zhuǎn)錄組分析總覽
        3.4.2 脂多糖突變株中與可拉酸生物合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄分析
        3.4.3 脂多糖突變菌中與鞭毛生物合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄分析
    3.5 大腸桿菌MG1655中可拉酸的合成受Rcs磷酸轉(zhuǎn)移系統(tǒng)調(diào)控
    3.6 基于可拉酸與脂多糖合成共享前體物質(zhì)的可拉酸分泌模型的構(gòu)建
    3.7 脂多糖突變株細(xì)胞外膜滲透性變化分析
    3.8 脂多糖結(jié)構(gòu)變化對細(xì)胞對抗生素敏感性的影響
        3.8.1 脂多糖突變株在LB和M9平板上對16種抗生素藥敏擴(kuò)散試紙的抑菌圈分析
        3.8.2 核心糖突變株在LB中對四種疏水性抗生素的MIC值分析
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]β-D-半乳糖苷酶活性測定方法的研究[J]. 周曉輝.  河北工業(yè)科技. 2004(05)

博士論文
[1]大腸桿菌脂多糖分子的核心多糖結(jié)構(gòu)變化對細(xì)胞膜及胞內(nèi)代謝的影響[D]. 王洲.江南大學(xué) 2016

碩士論文
[1]阪崎克羅諾腸桿菌胞外多糖合成的調(diào)控機(jī)制研究[D]. 陳思.江南大學(xué) 2018



本文編號：3640651