發(fā)布時(shí)間：2022-02-21 20:46

　　黃曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）是以二呋喃環(huán)和氧雜萘鄰?fù)獮榛窘Y(jié)構(gòu)的一類化合物,是一種毒性極強(qiáng)的真菌毒素,被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物,可引起肝癌等多種疾病,極易污染花生、玉米、小麥等農(nóng)產(chǎn)品及其食品,快速靈敏的AFB₁檢測(cè)方法的研發(fā)及應(yīng)用是防止其食品安全事件發(fā)生的基礎(chǔ)。核酸適配體是一段能與靶標(biāo)分子高親和力、特異性結(jié)合的單鏈寡核苷酸序列,具有穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)和特殊的三維構(gòu)象,被譽(yù)為“化學(xué)抗體”,可通過(guò)指數(shù)富集配體的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)從體外篩選獲得。本試驗(yàn)利用非固定氧化石墨烯法篩選AFB₁適配體,并以所獲得的AFB₁適配體為特異性識(shí)別探針,納米金為指示劑,建立了一種AFB₁的比色檢測(cè)方法,為食品安全提供技術(shù)支持。AFB₁特異性適配體的氧化石墨烯-SELEX篩選�；谘趸┛赏ㄟ^(guò)π-π共軛吸附單鏈寡核苷酸ssDNA,而對(duì)已結(jié)合靶標(biāo)的ssDNA吸附能力較弱的特性,設(shè)計(jì)了針對(duì)AFB_1... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 黃曲霉毒素B_1的研究進(jìn)展
        1.1.1 真菌毒素的概述
        1.1.2 黃曲霉毒素B
        1.1.3 黃曲霉毒素B_1 的限量標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.4 黃曲霉毒素B_1 的檢測(cè)方法
    1.2 SELEX技術(shù)及核酸適配體
        1.2.1 SELEX技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.2.2 SELEX技術(shù)篩選的方法
        1.2.3 核酸適配體的概述
        1.2.4 核酸適配體的優(yōu)點(diǎn)
        1.2.5 核酸適配體在檢測(cè)中的應(yīng)用
    1.3 本試驗(yàn)的立題意義與內(nèi)容
        1.3.1 本試驗(yàn)的立題意義
        1.3.2 本試驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容
第二章 非固定GO-SELEX篩選黃曲霉毒素B_1 適配體方法的建立
    2.1 前言
    2.2 主要材料與設(shè)備
        2.2.1 隨機(jī)單鏈DNA文庫(kù)和引物的構(gòu)建
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要緩沖液的配置
        2.2.4 主要儀器設(shè)備
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 氧化石墨烯與隨機(jī)文庫(kù)吸附條件的優(yōu)化
        2.3.2 ssDNA與氧化石墨烯孵育比例和時(shí)間的優(yōu)化
        2.3.3 正向篩選
        2.3.4 反向篩選
        2.3.5 PCR擴(kuò)增體系和反應(yīng)條件
        2.3.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
        2.3.7 PCR產(chǎn)物的純化
        2.3.8 磁珠分離法制備次級(jí)文庫(kù)
        2.3.9 回收率的計(jì)算
        2.3.10 終輪篩選
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 隨機(jī)文庫(kù)與氧化石墨烯吸附條件的優(yōu)化
        2.4.2 ssDNA與 GO質(zhì)量比例和時(shí)間的優(yōu)化
        2.4.3 各輪篩選產(chǎn)物的驗(yàn)證
        2.4.4 PCR擴(kuò)增體系退火溫度的優(yōu)化
        2.4.5 PCR擴(kuò)增體系循環(huán)次數(shù)的優(yōu)化
        2.4.6 篩選輪數(shù)的確定
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 黃曲霉毒素B_1核酸適配體的克隆和測(cè)序
    3.1 試驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 試驗(yàn)試劑
        3.1.2 緩沖液和培養(yǎng)基的配置
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 ssDNA的克隆
        3.2.2 ssDNA的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 陽(yáng)性克隆的菌液PCR鑒定和測(cè)序
        3.2.4 核酸適配體序列分析及二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬
        3.2.5 核酸適配體的親和性試驗(yàn)
        3.2.6 核酸適配體特異性分析試驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 PCR純化產(chǎn)物驗(yàn)證
        3.3.2 克隆、測(cè)序及序列分析
        3.3.3 候選核酸適配體的初級(jí)表征
        3.3.4 解離常數(shù)與親和力測(cè)定
        3.3.5 候選適配體的特異性分析
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章基于適配體的納米金粒子比色法檢測(cè)黃曲霉毒素B_1
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 儀器
        4.2.2 試劑
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 納米金的制備
        4.3.2 納米金濃度與適配體親和性測(cè)定
        4.3.3 氯化鈉濃度
        4.3.4 適配體的濃度
        4.3.5 黃曲霉毒素B_1 的檢測(cè)
        4.3.6 特異性的檢測(cè)
        4.3.7 大米樣品中黃曲霉毒素B_1 的加標(biāo)回收測(cè)定
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 納米金粒子比色法檢測(cè)黃曲霉毒素B_1 實(shí)驗(yàn)原理的驗(yàn)證
        4.4.2 氯化鈉溶液濃度的優(yōu)化
        4.4.3 適配體吸附納米金濃度的優(yōu)化
        4.4.4 甲醇含量的影響
        4.4.5 線性范圍和檢出限
        4.4.6 特異性分析
        4.4.7 大米樣品中黃曲霉毒素B_1 加標(biāo)回收試驗(yàn)
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]毛細(xì)管電泳篩選鹽酸克倫特羅核酸適配體的方法研究[J]. 楊歌,朱超,劉曉慧,王勇,屈鋒.  分析化學(xué). 2018(10)
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博士論文
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碩士論文
[1]核酸適配體文庫(kù)的構(gòu)建及ZEN適配體的初步篩選[D]. 侯思露.南昌大學(xué) 2018
[2]新城疫病毒核酸適配體的篩選研究[D]. 譚陽(yáng)通.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]氯霉素核酸適體的篩選及基于核酸適體生物傳感器的建立[D]. 段燁.北京化工大學(xué) 2016
[4]基于適配體的食品中黃曲霉毒素B1和M1的生物傳感器檢測(cè)方法研究[D]. 陳璐.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]幾種DNA生物傳感器用于微小RNA和真菌毒素的檢測(cè)[D]. 章溪.福建醫(yī)科大學(xué) 2015
[6]單核細(xì)胞增生性李斯特菌適配子的篩選及其初步應(yīng)用[D]. 徐寶霞.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[7]阪崎腸桿菌適配體制備及其應(yīng)用[D]. 韓曉曉.江南大學(xué) 2013
[8]氧化石墨烯對(duì)蛋白質(zhì)和DNA的構(gòu)象和功能的影響[D]. 魏曉磊.天津大學(xué) 2013
[9]真菌毒素寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用[D]. 王文鳳.江南大學(xué) 2012
[10]四種真菌毒素檢測(cè)方法的建立以及赭曲霉毒素A脫除方法的初步研究[D]. 楊超.中國(guó)海洋大學(xué) 2009



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