擴展青霉（Penicillium expansum）引起的青霉病害是蘋果采后主要病害,不僅導致蘋果的腐爛變質,造成巨大的經(jīng)濟損失;而且其產生的展青霉素嚴重威脅人類健康。殼聚糖是一種天然多糖,具有激發(fā)植物抗性和抑制病原微生物效應,因而在果蔬采后病害防治中有著廣泛應用。本實驗室前期研究結果顯示殼聚糖可顯著抑制擴展青霉,且通過一種能量依賴方式的吸收轉運到細胞內,暗示著可能存在胞內抑菌模式。本論文采用反向遺傳和生化細胞分析,探究殼聚糖的跨膜轉運途徑及胞內殼聚糖在其抑菌過程中的作用,從胞內的維度,在分子細胞水平解析殼聚糖的抑菌作用機制。本文獲得的主要研究結果如下:（1）采用三種內吞途徑特異性阻斷劑（鹽酸氯丙嗪、染料木黃酮和鹽酸阿米洛利）,發(fā)現(xiàn)均能抑制殼聚糖向胞內的轉運,且降低殼聚糖的in vitro和in vivo抑菌活性。其中,鹽酸氯丙嗪和染料木黃酮、鹽酸氯丙嗪和鹽酸阿米洛利、染料木黃酮和鹽酸阿米洛利、鹽酸氯丙嗪和染料木黃酮和鹽酸阿米洛利處理后,殼聚糖對青霉病害的抑制率分別下降19.3%、11.4%、3.3%和15.1%,表明殼聚糖主要是依賴網(wǎng)格蛋白和小窩蛋白介導的內吞作用進入擴展青霉胞內的,... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

殼聚糖的結構圖

江蘇大學碩士學位論文9第二章殼聚糖的跨膜轉運途徑及胞內殼聚糖在其抑菌過程中的效應分析2.1引言擴展青霉是梨果類采后腐爛的主要病原菌，每年都會因為腐爛病害造成巨大的經(jīng)濟損失；殼聚糖是一種綠色安全的天然產物，具有抗菌活性，被廣泛用于果蔬的采后病害防治。本實驗室在前期研究中發(fā)現(xiàn)殼聚糖能夠抑制擴展青霉孢子萌發(fā)和菌絲生長，并且觀察到殼聚糖能夠進入到孢子內部（圖2.1）；通過轉錄組數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)擴展青霉經(jīng)殼聚糖處理后，內吞通路相關的多數(shù)基因表達上調（圖2.2），暗示著殼聚糖可能通過特定的細胞內吞途徑進入細胞內。為進一步明確殼聚糖的吸收轉運途徑及胞內殼聚糖在其抑菌過程中的作用。本章采用內吞途徑特異性阻斷結合基因敲除反向遺傳驗證，對殼聚糖在擴展青霉中的跨膜轉運途徑及胞內殼聚糖在抑菌過程中的作用進行分析研究，進而在分子細胞水平闡明殼聚糖對擴展青霉的抑制作用機理。圖2.1殼聚糖吸收轉運分析Fig2.1Up-takeofFITClabeledchitosanbyPenicilliumexpansum[88]

基于跨膜轉運途徑和作用靶點分析的殼聚糖抑制擴展青霉分子機理研究10圖2.2擴展青霉經(jīng)殼聚糖作用后的內吞通路分析Fig.2.2EndocytosispathwayassociatedwithchitosantransportationinP.expansum[88]2.2試驗試劑與儀器2.2.1試驗菌種擴展青霉菌種（Penicilliumexpansum編號：3.3703），由中國普通微生物菌種保藏中心（CGMCC）提供。2.2.2主要試劑蘋果、土豆，購買自本地超市；殼聚糖（分子量100kDa，脫乙酰度93%）購買自浙江省金殼藥業(yè)有限公司；鹽酸阿米洛利（Amiloridehydrochloride）購買自美侖生物技術有限公司；溶壁酶購買自廣東微生物研究所；蝸牛酶和纖維素酶購買自上海瑞永生物；瓊脂粉，冰醋酸，葡萄糖、蔗糖、二甲基（DMSO）亞砜、硝酸鈉、氯化鉀、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、無水乙醇、果膠酶、胰蛋白胨等購買自上海國藥集團化學試劑有限公司；

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3607320