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釀酒酵母EHT1、EEB1基因?qū)ζ咸丫葡銡獾挠绊?/H1>
發(fā)布時(shí)間:2022-01-21 06:53
  為探討釀酒酵母醇-O-;D(zhuǎn)移酶編碼基因EHT1,EEB1在發(fā)酵代謝中對(duì)葡萄酒香氣成分的影響機(jī)制。以釀酒酵母EC1118菌株為出發(fā)菌株,通過(guò)同源重組技術(shù)構(gòu)建EHT1、EEB1的單基因及雙基因的缺失菌株,在基因及轉(zhuǎn)錄水平上檢測(cè)兩基因的敲除程度。在檢測(cè)缺失菌株的生長(zhǎng)及發(fā)酵性能之后,使其分別發(fā)酵模擬葡萄汁及澤香葡萄汁,以研究?jī)苫蛟贓C1118酵母乙基酯合成中的作用,以及討論其與高級(jí)醇、乙酸酯合成間存在的間接關(guān)系。探究缺失菌株與發(fā)酵澤香葡萄酒中香氣的變化,及兩基因?qū)ζ咸丫普w風(fēng)味的影響。1.采用同源重組技術(shù)分別構(gòu)建了兩目的基因EHT1、EEB1的同源敲除片段,并分別轉(zhuǎn)化敲除片段于EC1118酵母中,通過(guò)同源重組實(shí)現(xiàn)兩目的基因的敲除。成功構(gòu)建了3株缺失菌株△eht1、△eeb1、△eht1△eeb1,并檢測(cè)了3株缺失菌株中目的基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明,3株缺失菌株兩基因的表達(dá)量均有一定程度下降!鱡ht1菌株EHT1基因表達(dá)量降低了63.57%,△eeb1菌株EEB1基因的表達(dá)量降低了43.20%,△eht1△eeb1菌株EEB1基因的表達(dá)量降低了51.7%,EHT1基因的表達(dá)量未受顯著影響。... 

【文章來(lái)源】:齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】:90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

釀酒酵母EHT1、EEB1基因?qū)ζ咸丫葡銡獾挠绊? src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1019172925.nh0002'  style='max-width:500px'></p><br> 高級(jí)醇合成通路圖<br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1019172925.nh0003' alt='丁酸,天冬氨酸,途徑,高絲氨酸' style='max-width:500px'></p><br> 注:根據(jù) Park (2014) 圖補(bǔ)充繪制天冬氨酸途徑:天冬氨酸轉(zhuǎn)化為高絲氨酸,高絲氨酸由 THR4 基因編碼的蘇氨酸合成酶催化下合成蘇氨酸。蘇氨酸通過(guò) ILV1 基因編碼的蘇氨酸脫氫酶的作用轉(zhuǎn)化為 α-酮丁酸[23];高絲氨酸合成途徑[22]:可能是高絲氨酸轉(zhuǎn)化為中間物質(zhì)O-乙酰高絲氨酸、胱硫醚,最后形成最終產(chǎn)物 α-酮丁酸,該途徑未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道(如圖 1.2 所示)。圖 1.1 高級(jí)醇合成通路圖 <br><br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1019172925.nh0006' alt='質(zhì)粒提取,組件' style='max-width:500px'></p><br> (a) pUG6 質(zhì)粒提取;(b) pSH65 質(zhì)粒提取。M:mak B A+K A+K+B 獲取全長(zhǎng)為模板,以 A-F,A-R,B-F,B-R, K-F,anMX-loxP 3 組敲除片段。A 同源臂大小為 1果如圖 2.2 (a),同源臂 B 大小為 203 bp,結(jié)果均一致。通過(guò)重疊 PCR 以引物 A-F,K-R 及 A+K,A+K+B 敲除組件,敲除組件 A+K 大小為 1p。結(jié)果如圖 2.2 (c)(d)。2.2 (c)表示 A+K 組件,條帶。2.2 (d)表示 A+K+B 組件,在 2000 bp 處。圖 2.1 pUG6 pSH65 質(zhì)粒提取Figure 2.1 Plasmid extraction of pUG6 pSH65(a) (b) <br><br>【參考文獻(xiàn)】:<br>期刊論文<br>[1]熱帶假絲酵母肉毒堿乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因的刪除及功能鑒定[J]. 張利華,陳獻(xiàn)忠,陳振,沈微,樊游.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2018(08)<br>
[2]葡萄酒風(fēng)味物質(zhì)研究進(jìn)展[J]. 劉春艷,張靜,李棟梅,謝岳,王振平.  食品工業(yè)科技. 2017(14)<br>
[3]商業(yè)酵母對(duì)馬瑟蘭干紅葡萄酒香氣成分的影響[J]. 苗麗平,趙新節(jié),董書甲,姜?jiǎng)P凱,原苗苗.  中國(guó)釀造. 2016(10)<br>
[4]過(guò)表達(dá)EHT1基因?qū)︶劸平湍讣核嵋阴ドa(chǎn)能力的影響[J]. 李鋒,陳葉福,郭建,郭學(xué)武,肖冬光.  現(xiàn)代食品科技. 2014(03)<br>
[5]單萜醇類在啤酒發(fā)酵過(guò)程中的變化及對(duì)酒花香氣的貢獻(xiàn)[J]. 全巧玲,江偉,王德良,孫志偉,宋濤.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2013(05)<br>
[6]葡萄酒中釀酒酵母產(chǎn)生的重要香氣化合物及其代謝調(diào)控[J]. 郝瑞穎,王肇悅,張博潤(rùn),劉延琳.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2012(11)<br>
[7]基因敲除在工業(yè)微生物育種方面的應(yīng)用[J]. 宋安東,張沙沙,王風(fēng)芹,謝慧,田原.  生物學(xué)雜志. 2011(06)<br>
[8]基因敲除技術(shù)及其在微生物育種中的應(yīng)用[J]. 張紅巖,申乃坤,周興.  釀酒科技. 2010(04)<br>
<br>博士論文<br>[1]刺葡萄本土釀酒酵母的篩選與利用研究[D]. 陳文婷.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017<br>
[2]大腸桿菌系統(tǒng)改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途徑的構(gòu)建[D]. 康振.山東大學(xué) 2011<br>
<br>碩士論文<br>[1]利用大腸桿菌C4途徑合成5-氨基乙酰丙酸[D]. 劉文靜.山東大學(xué) 2015<br>
[2]BAT、HOM2基因敲除對(duì)黃酒酵母高級(jí)醇生成量的影響[D]. 齊亞楠.天津科技大學(xué) 2014<br>
<br><!--https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&dbname=CMFD201902&filename=1019172925.nh&uniplatform=NZKPT&v=gWnzgmi1NycZ6pB5TMufmtysVlntbKWL9BEctrVvt0jDkcjWyf4jS-0zA8WaNQKY-->
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