發(fā)布時間：2022-01-14 09:39

　　食源性致病菌是指以食品為傳播媒介可侵犯人體引起感染甚至傳染病的病原微生物,它所引起的食品安全問題和感染性疾病等一系列問題一直是威脅人類健康的巨大隱患。常見的致病菌如大腸桿菌（Escherichia coli,E.coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）極易引發(fā)細菌性食物中毒,嚴重者甚至?xí)＜叭祟惿�。因此針對于食源性致病菌的快速高效檢測方法的研發(fā)對食品安全風(fēng)險防控和人類細菌傳染性疾病的預(yù)防具有重要意義。然而傳統(tǒng)的微生物檢測方法耗時費力,快速檢測方法如聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）、酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）等存在著操作復(fù)雜、儀器材料昂貴、假陽性高等局限性。因此,發(fā)展一種簡單、快速、靈敏、高選擇性的檢測手段對致病菌進行監(jiān)控具有十分重要的現(xiàn)實意義。本文基于量子點（quantum dots,QDs）和納米金（gold nanoparticles,AuNPs）優(yōu)良的光學(xué)性質(zhì),建立了基于核酸適配體（Aptamer）的特異性識別及凝集... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

夾心法ELISA原理圖

庖囈禾褰鴇曇羌際醯募觳飩峁?氪?車奈⑸?錙嘌?ǖ募觳飩峁?蟹?常好的符合率，且其檢測的靈敏度和特異性與ELISA方法相差無幾[43]。Song等[44]研發(fā)了一種新型的基于免疫膠體金標記的層析紙條用于同時檢測志賀氏菌和大腸桿菌O157:H7，該層析試紙條能夠在5~10分鐘內(nèi)完成測試，并且具有高通量和易于操作的優(yōu)點，而無需復(fù)雜的設(shè)備和專業(yè)技能。免疫膠體金標記方法也存在不足，如膠體金產(chǎn)品批間差異較大，靈敏度低；采用物理吸附的方法結(jié)合，抗原/抗體容易從金顆粒表面脫離，標記物不穩(wěn)定；只能給出定性或者半定量結(jié)果等。圖1-2基于免疫膠體金標記的免疫層析法檢測原理圖Figure1-2Schematicdiagramofimmunochromatographicdetection1.1.3.4化學(xué)發(fā)光免疫分析CLIA是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合而發(fā)展起來的一項最新免疫測定技術(shù)�；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析兩個系統(tǒng)。免疫分析系統(tǒng)是將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶作為標記物，直接標記在抗原或抗體上，經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原一抗體免疫復(fù)合物�；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入氧化劑或酶的發(fā)光底物，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后，形成一個處于激發(fā)態(tài)的中間體，會發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài)，發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系，可利用標準曲線計算出被測物的含量，圖1-3說明了化學(xué)發(fā)光的基本原理。相比于免疫熒光標記方法，化學(xué)發(fā)光免疫分析不需要外來的光源，從而減少了光散射，降低了噪音信號的干擾，提高了檢測的靈敏度，擴大了線性動態(tài)范圍，在致病菌檢測領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用[45-48]。MariaMagliulo等[45]開發(fā)出了一種簡單而快速的多重夾心化學(xué)發(fā)光酶免疫測定法，用于同時檢測大腸桿

第1章緒論5主要孔中時，能夠特異性結(jié)合相應(yīng)單克隆抗體的細菌分別被捕獲在四個亞孔中，再進行化學(xué)發(fā)光測定達到同時多重檢測的目的。相對于常規(guī)的單分析物免疫測定法和經(jīng)典的微生物培養(yǎng)法，多重測得方法可以減少檢測時間并減少了樣品和試劑的使用�；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法的缺點在于化學(xué)發(fā)光的發(fā)射強度依賴于各種環(huán)境因素，在不同的環(huán)境體系中，發(fā)射強度和時間的曲線有較大的差別，所以必須嚴格控制外界的各種因素。圖1-3化學(xué)發(fā)光免疫分析原理圖Figure1-3Schematicdiagramofchemiluminescenceimmunoassay1.1.3.5免疫磁珠分離技術(shù)IMB是將抗原-抗體特異性免疫反應(yīng)與磁珠的磁性特點結(jié)合起來的在外加磁場下快速分離的一種新型分離技術(shù)，具有特異性強、操作便捷、分離效率高、速度快和設(shè)備簡單等優(yōu)點，已經(jīng)在細菌分離分析領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[49]。應(yīng)用于致病菌分離檢測領(lǐng)域的免疫磁珠主要分為以下兩類：直接偶聯(lián)的免疫磁珠和間接偶聯(lián)的免疫磁珠。直接偶聯(lián)的免疫磁珠是用修飾了氨基或羧基基團的磁珠，通過活潑酯法或戊二醛法活化后直接偶聯(lián)特異性抗體制備而成的；間接偶聯(lián)的免疫磁珠是在磁珠表面先偶聯(lián)第二抗體，再結(jié)合特異性抗體形成磁珠-二抗-特異性抗體復(fù)合物或在磁珠表面偶聯(lián)鏈霉親和素，再與標記有生物素的特異性抗體形成磁珠-鏈霉親和素-生物素-特異性抗體復(fù)合物。圖1-4說明了免疫磁珠分離捕獲的原理：在待檢的樣本中加入特異性免疫磁珠，由于抗原抗體的免疫反應(yīng)結(jié)合靶標細菌，再通過磁性分離達到目的性捕獲靶標的目的。Zhu[50]等人運用免疫磁珠成功地在食品中分離出大腸桿菌O157:H7，捕獲效率大于98%，并結(jié)合熒光標記的抗體檢測分離出的大腸桿菌O157:H7，檢測線為10cfu/mL。由于免疫磁珠具有捕獲效率高、特異性強等特點，可以應(yīng)用免疫磁珠在含有其他大?

【參考文獻】：
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