人乳一直被認(rèn)為是嬰兒最佳的食物來源,也是嬰兒配方粉的黃金標(biāo)準(zhǔn)。其中,人乳寡糖（Human milk oligosaccharides,HMOs）是僅次于乳糖和脂肪的第三大固體組分,在促進(jìn)嬰兒腸道菌群生長、完善免疫系統(tǒng)功能和抵抗病原體侵染過程中發(fā)揮著不可替代的作用。然而,HMOs結(jié)構(gòu)復(fù)雜,異構(gòu)體眾多且含量差異大,這些都對人乳結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的研究造成了巨大的困難。因此,開發(fā)人乳寡糖合適的分離、純化和結(jié)構(gòu)表征方法尤為重要。嬰兒配方粉一般以成熟的牛乳為原料,缺少人乳中普遍存在的絕大部分HMOs,只含有極低含量的唾液酸化寡糖,如3′-唾液酸乳糖（3′-Sialyllactose,3′-SL）和6′-唾液酸乳糖（6′-Sialyllactose,6′-SL）。隨著HMOs生物合成技術(shù)的發(fā)展,為了更好的模擬人乳以滿足嬰兒成長發(fā)育中的需要,在美國和歐盟2′-巖藻糖乳糖（2′-Fucosyllactose,2′-FL）和乳-N-新四糖（Lacto-N-neotetraose,LNn T）已獲批添加到嬰兒配方粉中。因此,需要開發(fā)合適的方法來對嬰兒配方粉中的HMOs進(jìn)行準(zhǔn)確的定性、定量分析。本文首先采用多維... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人乳寡糖的一維制備譜圖

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文9圖1-1人乳寡糖的一維制備譜圖我們選取一款具有親水相互作用和陽離子交換作用的兩性離子混合模式材料ClickTE-GSH作為一維制備色譜的材料。ζ電勢顯示，當(dāng)pH>2時，ClickTE-GSH表面帶負(fù)電荷，可以使唾液酸化寡糖與中性寡糖分離[17]。在乙醇-水體系下，酸性寡糖和ClickTE-GSH表面均帶負(fù)電荷，由于靜電排斥作用，酸性寡糖在死時間附近被排出，而乳糖和中性寡糖由于親水屬性被很好地保留，從而達(dá)到將酸性寡糖和中性寡糖分離的目的。一維制備譜圖如圖1-1所示，共得到了5個餾分，包括酸性寡糖餾分Fr0-6，乳糖餾分Fr6-18和中性寡糖餾分Fr18-33、Fr33-42和Fr42-55。分別對8個餾分進(jìn)行濃縮處理，然后凍干處理后得到固體。按照2.2中的“一維制備所得酸性寡糖餾分的分析條件”和“一維制備所得中性寡糖餾分的分析條件”對各餾分進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果如圖1-2和圖1-3所示。從液相色譜圖看，F(xiàn)r0-6中含有系列酸性寡糖。同時，通過乳糖的保留時間及ESI-MS測定分子量，可以初步推斷中性寡糖各個餾分所含寡糖的聚合度，均已標(biāo)示在圖1-3中。酸性寡糖的餾分分析：圖1-2一維制備所得酸性寡糖餾分分析色譜圖

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10中性寡糖的餾分分析：圖1-3一維制備所得中性寡糖各餾分分析色譜圖2.酸性人乳寡糖的分離制備將一維制備得到的酸性寡糖餾分（Fr0-6）濃縮后用于第二維的XAmide色譜柱分離純化。XAmide是本人所在課題組自主合成的一種新型酰胺固定相，具有很好的親水作用和弱陰離子交換作用，能夠?qū)λ嵝匀巳楣烟堑葮O性化合物進(jìn)行很好的保留及分離。通過對分離條件進(jìn)行優(yōu)化，最后得到如圖1-4所示的二維制備結(jié)果。


本文編號：3569483