本文以云南產(chǎn)灰褐牛肝菌（Boletus griseus）為原料,制備灰褐牛肝菌黑色素。對(duì)該黑色素的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,推測(cè)其結(jié)構(gòu)式。制備了黑色素的氧化降解產(chǎn)物,對(duì)其進(jìn)行化學(xué)組成及光譜學(xué)性質(zhì)研究,進(jìn)一步闡明了黑色素對(duì)益生菌的作用。主要研究結(jié)果如下:1.采用堿溶酸沉法制取灰褐牛肝菌黑色素粗提物,得率為10.38%,用酸水解和有機(jī)試劑對(duì)粗提物進(jìn)行純化處理,制得純化后黑色素,標(biāo)記為BgM,BgM不溶于酸性溶液、水溶液和常用有機(jī)試劑,溶于堿性溶液。BgM的紫外-可見吸收光譜最大吸收峰為214 nm,與天然黑色素的紫外最大吸收一致�；液峙８尉谏卮痔嵛锷珒r(jià)為213,黑色素BgM色價(jià)的為954.8,達(dá)到粗提物的4.48倍,說明黑色素純度有了很大提高。2.采用場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡、元素分析法、紅外光譜法、核磁共振¹H譜和¹³C譜、熱解-GC/MS和UPLC-MS/MS等方法對(duì)灰褐牛肝菌黑色素結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡圖發(fā)現(xiàn)黑色素為不規(guī)則的片狀顆粒,平均粒徑約為1.25μm。元素分析結(jié)果顯示,該黑色素的C、H、N、S和O元素的百分含量分別為56.38%、5.86%、6... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

灰褐牛肝菌新鮮子實(shí)體Fig.1.1ThefruitingbodiesofBoletusgriseus

昆明理工大學(xué)碩士學(xué)位論文6在元素組成的差別表現(xiàn)為DHN黑色素不含氮元素，而DOPA黑色素含有氮元素。上述兩種類型的黑色素都來自同一個(gè)前體L-酪氨酸的酪氨酸酶氧化。DOPA黑色素合成途徑如圖1.2所示。酪氨酸在酪氨酸酶的催化作用下形成多巴（DOPA），隨后形成多巴醌結(jié)構(gòu)。多巴醌進(jìn)一步形成多巴色素，多巴色素與CO2作用脫羧形成DHI，在氧化酶的作用下氧化成5,6-吲哚醌，也可以通過多巴色素異構(gòu)酶（TRP-2）轉(zhuǎn)化為DHICA，進(jìn)一步經(jīng)5,6-二羥基吲哚-2-羧酸氧化酶（TRP-1）形成5,6-吲哚醌羧酸。5,6-吲哚醌與5,6-吲哚醌羧酸以不同比例聚合就形成不同結(jié)構(gòu)類型的真黑色素。在半胱甘酸或谷胱甘肽存在時(shí)，會(huì)抑制真黑色素形成反應(yīng)的發(fā)生，轉(zhuǎn)而使多巴醌轉(zhuǎn)化為半胱氨酰多巴，進(jìn)而形成棕黑色素。在此合成過程中，酪氨酸、多巴以及多巴醌這三種物質(zhì)在酪氨酸酶的作用下可以互相轉(zhuǎn)化，因此成為黑色素形成過程中的限速步驟，在底物中添加酪氨酸或L-DOPA能夠促進(jìn)黑色素的形成，提高其產(chǎn)量。圖1.2DOPA黑色素合成途徑Fig.1.2ThesynathesisofDOPAmelaninDHN黑色素在子囊菌亞門和半知菌亞門真菌中廣泛存在，醋酸鹽在alb1基

昆明理工大學(xué)碩士學(xué)位論文7因產(chǎn)物多聚酮（polyketide）合成酶的作用下合成羥萘（4HN），在NADH作用還原成scytalone(SCY)，經(jīng)SCY脫水酶（由rsy1基因編碼產(chǎn)物）作用轉(zhuǎn)化成三羥萘（3HN），然后在buf1基因所編碼的酶產(chǎn)物作用下，即依賴于NADPH脫氫酶，以3HN為底物還原成Vermelone（VER），VER經(jīng)脫水成二羥萘，最后合成多聚二羥黑色素[60]，見圖1.3。圖1.3DHN黑色素合成途徑Fig.1.3ThesynathesisofDHNmelanin目前，針對(duì)DOPA黑色素的研究最詳盡，而DHN黑色素則是目前定性最好的黑色素。黑色素的生物合成途徑十分復(fù)雜，黑色素的數(shù)量和類型因物種而異，動(dòng)物來源和微生物來源的黑色素合成途徑主要符合DOPA途徑，而植物來源黑色素合成路徑有較大差別，它們大部分是由黃烷-3-醇或黃烷-3,4-二醇等酚類物質(zhì)經(jīng)多酚氧化酶催化而氧化聚合而成[61]。真菌來源的黑色素合成途徑以DHN途徑和L-DOPA[62,63]。有研究表明黑曲霉（Aspergillusniger）、黃曲霉（Aspergillusflavus）和溜曲霉（Aspergillustamarii）經(jīng)DOPA途徑合成黑色素，而土曲霉（Aspergillusterreus）和塔賓曲霉（Aspergillustubingensis）經(jīng)DHN途徑合成黑色素[64]。值得注意的是，不同途徑合成的黑色素其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)相似。

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