三斑海馬隸屬于海龍科,是一種集藥用性、食用性和觀賞性于一身的小型珍稀海洋硬骨魚,廣泛分布于東印度洋和太平洋西北部。三斑海馬富含蛋白質(zhì)和磷脂等多種有益于人體健康的生物活性成分,因而具有增強(qiáng)性功能、益腎、抗氧化和抗血栓等保健功效。目前,酒精性肝病等各種類型的肝病仍然是世界性的健康難題。動物和體外肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,緩激肽、海洋膠原蛋白肽、雞肉蛋白肽和玉米蛋白肽等生物活性肽均具有一定保肝效果。鑒于此,本研究以三斑海馬（10～13 cm）為原料,采用堿性蛋白酶酶解、透析、連續(xù)色譜分離,從中分離得到一種活性肽;隨后以L-O2人正常肝細(xì)胞乙醇損傷模型研究其體外保肝特性。主要結(jié)論如下:1.三斑海馬活性肽的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定通過堿性蛋白酶酶解、透析、Sephadex G-25層析分離和RP-HPLC純化,得到一種多肽。質(zhì)譜儀鑒定該肽一級結(jié)構(gòu)為Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala（PAGPRGPA,721.39 Da）;體外測定其ACE抑制活性,IC₅₀值為7.90μM;圓二色譜儀分析表明,該肽由6.0%α螺旋,31.5%β折疊（26.6%反平行β折疊,4.9... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

三斑海馬及其分布

三斑海馬活性肽的制備及體外保肝特性的研究141.5技術(shù)路線按圖2所示方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。圖2技術(shù)路線圖Fig.2Schematicillustrationofexperimentaldesign

三斑海馬活性肽的制備及體外保肝特性的研究30海洋復(fù)雜多樣、極端的生態(tài)環(huán)境，造就了海洋生物多樣性及其所含生物活性物質(zhì)的新穎性、多樣性和獨(dú)特性。現(xiàn)有研究表明，海洋魚類蛋白酶解物、膜分離物均較難分離（Alemánetal.,2011；Heetal.,2013）。三斑海馬也不例外，三斑海馬酶解液因其成分復(fù)雜和樣品本身性質(zhì)，也較難分離（徐克寒，2015）。因此，在現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下，采取透析除雜，以減小分離難度。同時(shí)，選用較長玻璃層析柱，提高分離效果。鑒于層析柱較長時(shí)反壓也越大，洗脫流速也相應(yīng)減小，影響分離效果。在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，設(shè)定流速0.3mL/min，同時(shí)，選擇超純水為洗脫液，避免NaCl等鹽溶液洗脫后除鹽步驟的樣品損失（徐克寒，2015）。在確定上樣體積2mL、洗脫流速0.3mL/min、超純水為洗脫液后，實(shí)驗(yàn)研究了不同上樣濃度（25、50、100mg/mL）對層析分離效果的影響。如圖3所示，上樣濃度為25mg/mL和50mg/mL時(shí)，分離效果相似，但前者各峰吸光度值相對較小，表明多肽、游離氨基酸和蛋白質(zhì)等物質(zhì)含量較低（Lew，2004），不利于收集。而上樣濃度為100mg/mL時(shí)分離效果相對較差。因此，最后選取上樣濃度為50mg/mL。圖3不同上樣濃度對SephadexG-25層析分離效果的影響。（A）上樣濃度為25mg/mL；（B）上樣濃度為50mg/mL；（C）上樣濃度為100mg/mLFig.3EffectofdifferentloadingconcentrationsonchromatographicseparationofSephadexG-25.(A)25mg/mL;(B)50mg/mL;(C)100mg/mL

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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