食品添加劑安全評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)建立在單一的食品添加劑的毒性效應(yīng)基礎(chǔ)上,然而在食品工業(yè)中,一種食品常常包含幾種食品添加劑。多種食品添加劑一同在人體內(nèi)則可能產(chǎn)生相加、協(xié)同、拮抗等聯(lián)合作用,這對(duì)傳統(tǒng)食品毒理學(xué)及食品添加劑的毒性評(píng)估提出了新的挑戰(zhàn)。本論文采用了Caco-2細(xì)胞模型和mini-gut腸道類器官模型,對(duì)食品工業(yè)常見(jiàn)的食品添加劑聯(lián)合應(yīng)用的毒性進(jìn)行了評(píng)價(jià),主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:（1）首先以Caco-2細(xì)胞模型,分別研究評(píng)價(jià)了山梨酸鉀、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、苯甲酸鈉和脫氫乙酸鈉這五種食品防腐劑以及糖精鈉、三氯蔗糖、安賽蜜、甜蜜素和阿斯巴甜這五種人工甜味劑對(duì)細(xì)胞增殖活力的影響。結(jié)果表明,它們的細(xì)胞增殖抑制毒性,都表現(xiàn)出劑量正相關(guān)性。毒性作用順序分別為:焦亞硫酸鈉>亞硫酸鈉>山梨酸鉀>脫氫乙酸鈉>苯鉀酸鈉,糖精鈉>安賽蜜>阿斯巴甜>甜蜜素>三氯蔗糖。選擇了食品工業(yè)中較常用的山梨酸鉀和糖精鈉這兩種食品添加劑進(jìn)行聯(lián)合實(shí)驗(yàn),利用MTT法及2×2析因分析法發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖活力的毒性是協(xié)同聯(lián)合作用,并利用高內(nèi)涵分析系統(tǒng)及qPCR技術(shù),發(fā)現(xiàn)山梨酸鉀和糖精鈉聯(lián)合組能... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 食品添加劑的使用及研究現(xiàn)狀
        1.1.1 常用的食品防腐劑的使用及研究現(xiàn)狀
        1.1.2 常用人工甜味劑的使用及研究現(xiàn)狀
    1.2 食品添加劑的安全性評(píng)價(jià)方法和研究現(xiàn)狀
        1.2.1 傳統(tǒng)的食品添加劑安全性評(píng)價(jià)方法
        1.2.2 細(xì)胞學(xué)安全性評(píng)價(jià)研究現(xiàn)狀
        1.2.3 食品添加劑聯(lián)合作用的類型和評(píng)價(jià)方法
    1.3 Mini-gut細(xì)胞模型研究現(xiàn)狀
    1.4 研究目的及內(nèi)容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
        1.4.3 研究?jī)?nèi)容
2 不同防腐劑和人工甜味劑單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)Caco-2 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
    2.1 引言
    2.2 材料及儀器
        2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力
        2.3.4 食品添加劑單獨(dú)及聯(lián)合作用的HCA多參數(shù)分析
        2.3.5 食品添加劑單獨(dú)及聯(lián)合作用致細(xì)胞凋亡的通路探究
        2.3.6 統(tǒng)計(jì)處理
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 5 種防腐劑和5種人工甜味劑對(duì)細(xì)胞活力的影響
        2.4.2 山梨酸鉀和糖精鈉單獨(dú)及聯(lián)合作用的多指標(biāo)評(píng)價(jià)
        2.4.3 亞硫酸鈉和甜蜜素單獨(dú)及聯(lián)合作用的多指標(biāo)評(píng)價(jià)
    2.5 小結(jié)
3 不同防腐劑和人工甜味劑單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)mini-gut生長(zhǎng)的影響
    3.1 引言
    3.2 材料及儀器
        3.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 小腸隱窩的分離與培養(yǎng)
        3.3.2 小腸類器官的傳代
        3.3.3 小腸類器官的凍存
        3.3.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.3.5 MTT法對(duì)mini-gut細(xì)胞活力的測(cè)定
        3.3.6 不同防腐劑及人工甜味劑對(duì)mini-gut生長(zhǎng)的影響
        3.3.7 不同防腐劑聯(lián)合人工甜味劑對(duì)mini-gut生長(zhǎng)的影響
        3.3.8 統(tǒng)計(jì)處理
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 五種常見(jiàn)的防腐劑對(duì)Mini-gut生長(zhǎng)的影響
        3.4.2 五種常見(jiàn)的人工甜味劑對(duì)Mini-gut生長(zhǎng)的影響
        3.4.3 防腐劑和人工甜味劑聯(lián)合作用對(duì)Mini-gut生長(zhǎng)發(fā)育的影響
    3.5 小結(jié)
4 山梨酸鉀和糖精鈉單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)腸道細(xì)胞增殖分化的影響
    4.1 引言
    4.2 材料及儀器
        4.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        4.2.3 儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 小腸隱窩的分離與培養(yǎng)
        4.3.2 小腸類器官的傳代
        4.3.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.3.4 Ed U細(xì)胞增殖檢測(cè)
        4.3.5 細(xì)胞總蛋白提取及蛋白含量檢測(cè)
        4.3.6 總SOD活性檢測(cè)
        4.3.7 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶檢測(cè)
        4.3.8 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)
        4.3.9 統(tǒng)計(jì)處理
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 山梨酸鉀和糖精鈉對(duì)Mini-gut生長(zhǎng)的影響
        4.4.2 山梨酸鉀和糖精鈉對(duì)Mini-gut細(xì)胞分化的影響
        4.4.3 山梨酸鉀和糖精鈉對(duì)mini-gut的氧化應(yīng)激分析
        4.4.4 亞硫酸鈉和甜蜜素對(duì)mini-gut生長(zhǎng)的影響
        4.4.5 亞硫酸鈉和甜蜜素對(duì)mini-gut細(xì)胞分化的影響
        4.4.6 亞硫酸鈉和甜蜜素對(duì)mini-gut的氧化應(yīng)激分析
        4.4.7 食品添加劑促進(jìn)mini-gut損傷和凋亡的相關(guān)通路探究
    4.5 小結(jié)
5 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝龍膠囊聯(lián)合用藥抗肝纖維化的體外篩選實(shí)驗(yàn)[J]. 陳麗平,楊強(qiáng)麗,李輝,杜一民,焦素月,邵明園,賴泳.  大理大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(04)
[2]腫瘤3D細(xì)胞模型在體外藥敏實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用[J]. 劉艷紅,李靜,余孝其,王娜,劉媛,張?bào)K.  實(shí)驗(yàn)室研究與探索. 2019(03)
[3]氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡通路的研究進(jìn)展[J]. 李芊芊.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(12)
[4]MTT比色法測(cè)定煙酰胺類化合物對(duì)植物病原細(xì)菌的抑菌活性[J]. 普特,楊云海,王凱博,葉敏,范黎明,付立新,蘇發(fā)武,查友貴.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2019(01)
[5]亞硫酸鈉對(duì)小鼠睪丸組織氧化損傷作用研究[J]. 錢(qián)滿,孫瑩瑩,常趙陽(yáng),李路路,何相龍,柳犖,李夢(mèng)云.  當(dāng)代畜牧. 2018(15)
[6]小鼠小腸類器官體外培養(yǎng)體系的建立與應(yīng)用[J]. 萬(wàn)光升,張新艷.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2017(05)
[7]氧化應(yīng)激對(duì)動(dòng)物腸道的危害及其營(yíng)養(yǎng)學(xué)緩解措施[J]. 韓月,黃友解,王友明.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2017(04)
[8]細(xì)胞自噬與活性氧的關(guān)系[J]. 路會(huì)俠,李紹波.  海南醫(yī)學(xué). 2017(13)
[9]匹美克莫司使線粒體受損并激活A(yù)MPK信號(hào)通路與線粒體自噬[J]. 吳艷陽(yáng),胡涌泉,周海燕,張博,李梢.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2017(07)
[10]高內(nèi)涵篩選技術(shù)應(yīng)用于藥物毒理方面的研究進(jìn)展[J]. 李毅.  醫(yī)療裝備. 2015(16)



本文編號(hào)：3435201