乳酸菌（Lactic acid bacteria）是人們公認的食品級微生物。其被廣泛應用于食品生產(chǎn)、醫(yī)學工程、家畜養(yǎng)殖和發(fā)酵產(chǎn)業(yè)等。微生物制劑屬于活性益生菌產(chǎn)品,能夠改善生物體內生態(tài)平衡,提升主體的健康水準。本實驗選擇基因工程的方法來構建一種能夠過量表達脂肪酶的乳酸桿菌工程菌W1/p MG36e-lipase-nis I。這種乳酸菌不包含抗生素等選擇性標記標記,完全符合食品級別安全規(guī)范。實驗擴增脂肪酶基因（lipase）是以植物乳酸桿菌W1基因組為模板,在質粒p ET30a中插入該脂肪酶基因（lipase）,共同構建得到大腸桿菌表達載體p ET30a-lipase,再用購買的含有乳鏈菌肽抗性基因（nis I）的質粒p ET30a為模板進行nis I擴增,并將該基因插入到表達載體p MG36e-lipase中,將紅霉素標記替換掉,成功得到乳酸菌表達載體p MG36e-lipase-nis I,運用電轉化法轉化將其轉化到W1中,進一步構建出菌株W1/p MG36e-lipase-nis I,檢測其在Nisin環(huán)境中生存及表達能力。結果表明,W1/p MG36e-lipase-nis I在乳... 

【文章來源】：齊魯工業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

nisZ的分子結構

第1章緒論10如圖1-2（a）、（b）為2種滅菌原理圖。一種是乳鏈菌肽通過微mol濃度創(chuàng)造出非靶向目標（即無脂質II）介導的通路，稱為“桶-板模型”或“插入模型”。另外一種是乳鏈菌肽通過摩爾濃度，使細菌細胞膜的雙層脂質II形成通路，與此同時，乳鏈菌肽與脂質II賬戶合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，稱之為“楔型模型”。圖1-2乳鏈菌肽作用機制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）為“桶-板模型”；（b）為“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳鏈菌肽的轉錄基因微生物合成乳鏈菌膚的過程中主要有11個基因參與。如圖1-3，是乳鏈菌肽基因簇，其基因簇按順序排列在乳鏈菌肽-蔗糖轉座子上，位于DNA左端約14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z負責完成乳鏈菌肽前體的編碼。nisB負責翻譯過程并完成修飾。nisC起催化作用，脫去水殘基和半胱氨酸，最終得到硫醚鍵。nisT和nisP起輸出和激活作用。nisI/FEG涉及菌體自身免疫力有關。nisI基因主要是對乳鏈菌肽產(chǎn)生的抗性作用，乳鏈菌肽基因與nisFEG共同作用時，可以達到最強的免疫作用。nisR和nisK是雙組分調節(jié)基因。圖1-3乳鏈菌肽基因簇的組成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳鏈菌肽誘導的啟動子；表示：組成啟動子；○表示：終止子1.3.4乳鏈菌肽標記基因的抗性篩選

第1章緒論10如圖1-2（a）、（b）為2種滅菌原理圖。一種是乳鏈菌肽通過微mol濃度創(chuàng)造出非靶向目標（即無脂質II）介導的通路，稱為“桶-板模型”或“插入模型”。另外一種是乳鏈菌肽通過摩爾濃度，使細菌細胞膜的雙層脂質II形成通路，與此同時，乳鏈菌肽與脂質II賬戶合并，起到抑制肽聚糖合成的作用，稱之為“楔型模型”。圖1-2乳鏈菌肽作用機制模型[54]Fig.1-2TransactionalmodelsofNisin（a）為“桶-板模型”；（b）為“楔型模型”(a)Is"bucketplatemodel";（b）is"wedgemodel"1.3.3乳鏈菌肽的轉錄基因微生物合成乳鏈菌膚的過程中主要有11個基因參與。如圖1-3，是乳鏈菌肽基因簇，其基因簇按順序排列在乳鏈菌肽-蔗糖轉座子上，位于DNA左端約14kb的片段上，次序是nisA/Z、nisT、nisC、nisI、nisP、nisR、nisK、nisF、nisE、nisG。其中nisA/Z負責完成乳鏈菌肽前體的編碼。nisB負責翻譯過程并完成修飾。nisC起催化作用，脫去水殘基和半胱氨酸，最終得到硫醚鍵。nisT和nisP起輸出和激活作用。nisI/FEG涉及菌體自身免疫力有關。nisI基因主要是對乳鏈菌肽產(chǎn)生的抗性作用，乳鏈菌肽基因與nisFEG共同作用時，可以達到最強的免疫作用。nisR和nisK是雙組分調節(jié)基因。圖1-3乳鏈菌肽基因簇的組成[54]Fig.1-3TheentireNisingene表示：乳鏈菌肽誘導的啟動子；表示：組成啟動子；○表示：終止子1.3.4乳鏈菌肽標記基因的抗性篩選

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]淺述乳酸菌制劑在畜禽生產(chǎn)中的應用[J]. 徐婷婷.  現(xiàn)代畜牧科技. 2016(01)
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[6]乳酸菌功能作用及其在生產(chǎn)中的應用[J]. 張曉黎,吳興壯,張華.  農(nóng)業(yè)工程技術(農(nóng)產(chǎn)品加工業(yè)). 2015(05)
[7]新疆酸奶中高產(chǎn)蛋白酶與產(chǎn)脂肪酶乳酸菌的篩選[J]. 何捷,曾小群,呂鳴春,毛仲瑄,王象林,潘道東.  食品科學. 2015(17)
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博士論文
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碩士論文
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[2]產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的分離及在雞飼喂上的應用[D]. 郭威.河北農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]多元電解質對有機相中脂肪酶拆分炔戊醇的激活效應[D]. 崔麗娟.浙江大學 2014
[4]耐高溫酸性脂肪酶產(chǎn)生菌的選育及其酶學特性研究[D]. 張開平.河南工業(yè)大學 2013
[5]發(fā)酵飼料對肉鴨生長性能及回腸菌群的影響[D]. 尹鵬鵬.四川農(nóng)業(yè)大學 2012
[6]脂肪酶和胰蛋白酶的固定化及共固定化研究[D]. 劉自琴.華南理工大學 2012
[7]乳酸菌表達載體的構建及初步應用[D]. 代偉麗.天津科技大學 2012
[8]極地適冷菌Psychrobacter sp.G低溫脂肪酶基因克隆與異源表達[D]. 崔碩碩.國家海洋局第一海洋研究所 2011
[9]畢赤酵母翻譯延伸因子1-α啟動子在南極假絲酵母脂肪酶B表達上的應用[D]. 袁圍.華南理工大學 2011
[10]袋裝混菌發(fā)酵全價飼料的研究[D]. 呂鋒.安徽農(nóng)業(yè)大學 2010



本文編號：3426183