小麥及小麥芽是啤酒釀造的傳統(tǒng)原料,AX是小麥和小麥芽中主要的NSP。在啤酒生產(chǎn)過(guò)程中,AX的分子大小和含量對(duì)麥汁和啤酒的粘度、濁度、過(guò)濾速度、發(fā)泡特性等有重要影響。β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶是最重要的AX降解酶。本文研究了小麥芽中β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶的酶學(xué)性質(zhì)（最適pH、最適溫度、pH穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性及金屬離子對(duì)其活性的影響）,對(duì)小麥芽β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶進(jìn)行了分離純化,蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定,并研究了純化酶對(duì)小麥源AX的降解作用。研究結(jié)果如下:（1）β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶的最適pH值是5.5-6.0;在pH4.5、5.5和6.5條件下,保溫30、50、60min十分穩(wěn)定;最適溫度為40℃-45℃,失活溫度為75℃;在20℃和40℃條件下,β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶保溫120min十分穩(wěn)定,但在50℃下保溫60min,酶活力僅為43.91%,在55℃和60℃下表現(xiàn)出較高的熱敏感性;在10mM/L的濃度下,Cu²⁺,Ag⁺和EDTA對(duì)酶活力有強(qiáng)烈的抑制作用;Ca²⁺,Mg²⁺和Mn²⁺

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

木聚糖酶的作用位點(diǎn)

小麥芽木聚糖內(nèi)切酶的純化鑒定及對(duì)小麥源阿拉伯木聚糖的降解特性32研究了小麥芽β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在40℃，pH4.5，5.5和6.5條件下的穩(wěn)定性，圖4展示了研究結(jié)果。圖4A顯示小麥芽β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在pH4.5條件下，保溫30min后酶活力沒(méi)有顯著性的變化（p<0.05），此后酶活力緩慢下降。保溫60min后，相對(duì)酶活下降到73.61%。表明β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在pH4.5條件下，保溫30min內(nèi)非常穩(wěn)定，30～60min內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。與β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在pH4.5條件下相比，該酶在pH5.5條件下更穩(wěn)定（圖4B），隨著保溫時(shí)間的增加，β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶的酶活力基本不變，并且保溫60min后殘余酶活力在93.53%～100%。因此可以看出，在保溫時(shí)間為60min以內(nèi)，β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在pH5.5條件下酶活很穩(wěn)定。從圖4C中可以明顯看出，殘余酶活力無(wú)顯著性差異，所以β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶在pH6.5的環(huán)境下保溫60min極穩(wěn)定。Benjavongkulchai和Spencer（1986）在對(duì)大麥芽糊粉層中木聚糖酶的研究中得到過(guò)相似的結(jié)論。圖4β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶的pH穩(wěn)定性A：pH4.5，B：pH5.5，C：pH6.5。Fig.4ThepHstabilityoftheendo-1,4-β–xylanaseABCA:pH4.5,B:pH5.5,C:pH6.5.

eactivity(u)木糖苷酶活β-D-xylosidaseactivity(u)粗酶液8230.53±286.183538.45±106.330.43±0.0223445.10±497.00131825.60±70.76AS0-20856.93±4.2354.73±0.800.06±0.00129.22±2.74877.24±2.74AS20-401269.59±11.06124.65±0.780.10±0.002588.56±47.7412043.00±0.00AS40-601043.36±7.9041.71±3.250.04±0.00908.40±19.75-AS60-80421.62±8.163.25±1.410.01±0.0030.59±7.47404.65±9.47AS80-10036.21±17.2419.67±3.930.54±0.098.00±1669.33±9.243.2.2SP-SepharoseFastFlow陽(yáng)離子交換層析圖8顯示的是AS0-20和AS20-40經(jīng)過(guò)SP-SepharoseFastFlow陽(yáng)離子交換層析柱洗脫下來(lái)的組分。用濃度分別為0，0.1，0.2和0.5MNaCl的緩沖液I洗脫下來(lái)4個(gè)峰（C-1，C-2，C-3和C-4）。從表5可以看出，C-3和C-4洗脫下來(lái)的酶液比活力較高，但是在洗脫過(guò)程中兩個(gè)峰對(duì)應(yīng)的酶液體積比較大，酶蛋白濃度低，β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶酶活測(cè)定中樣品與對(duì)照的吸光值差別非常校所以選擇C-1峰，該峰對(duì)應(yīng)的酶液蛋白含量與β-1,4-木聚糖內(nèi)切酶酶活力均最高，分別為1405.23mg和649.13u。相應(yīng)的比活力為0.46u/mg，純化倍數(shù)為1。所以C-1峰對(duì)應(yīng)的酶液確定為此步分離純化收集的目標(biāo)酶液。圖8陽(yáng)離子交換層析洗脫曲線Fig.8Elutioncurveofcationexchangechromatography

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3398382