發(fā)布時(shí)間：2021-08-12 00:26

　　大腸埃希氏菌 0157:H7（Escherichia coli 0157:H7,E.coli 0157:H7）是最重要的食品致病菌之一,抗生素殘留也是危害食品安全的重要因素,因此開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便快速、適用范圍廣、檢測(cè)準(zhǔn)確率高的快速檢測(cè)方法,能夠有效防控食源性疾病的發(fā)生。同時(shí)結(jié)合多種傳感器及新型多功能納米標(biāo)記探針的檢測(cè)方法也是科研人員的研究熱點(diǎn),并逐漸成為檢驗(yàn)領(lǐng)域的發(fā)展趨勢(shì)。研究首先設(shè)計(jì)了一種結(jié)合葡萄糖傳感器和雙功能納米探針的酶聯(lián)免疫層析技術(shù),又開(kāi)發(fā)了一種結(jié)合擬過(guò)氧化物酶納米探針的免疫比色技術(shù)實(shí)現(xiàn)了大腸埃希氏菌O157:H7的定量檢測(cè),最后針對(duì)牛原奶中常見(jiàn)的氯霉素殘留設(shè)計(jì)了一種基于背景熒光猝滅探針的定量免疫層析技術(shù)。得到了一系列操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且具有一定創(chuàng)新性的快速檢測(cè)方法,具體的工作內(nèi)容如下:1、基于葡萄糖傳感器和雙功能化納米探針的定量免疫層析法快速檢測(cè)大腸埃希氏菌O157:H7隨著檢測(cè)需求的提升和檢測(cè)技術(shù)的革新,定量檢測(cè)已成為重要的研究和開(kāi)發(fā)方向之一。免疫層析技術(shù)因具有多種優(yōu)點(diǎn)而被廣泛采用,但現(xiàn)有定量免疫層析方法均需昂貴儀器;便攜式葡萄糖傳感器是一種開(kāi)發(fā)和應(yīng)用非常成功的定量... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?（Ａ）試紙條的結(jié)構(gòu)；（Ｂ）雙功能化磁珠標(biāo)記過(guò)程及其與￡．?ｃｏ／／０１５７：Ｈ７的結(jié)??合過(guò)程；（Ｃ）該方法對(duì)［ｃｏ／／?０１５７：Ｈ７的檢測(cè)過(guò)程??

?的規(guī)則球形，且表現(xiàn)出良好的分散性，這使得雙功能化磁珠可以輕易地在試紙條??上移動(dòng)。圖２－２Ｂ顯示磁珠在用磁鐵吸附幾秒后就可以完全從溶液中分離出來(lái)，??說(shuō)明磁珠可以被用來(lái)分離富集菌液，且有助于簡(jiǎn)化磁珠的洗滌步驟。觀察未經(jīng)修??飾的磁珠紅外圖（圖３－２Ｃ），認(rèn)為在１６００?ｃｍ＿１和１３５０?ｃｍ—１處出現(xiàn)的兩個(gè)峰均為??ＣＣＸＪ特征峰［７３］。這些結(jié)果說(shuō)明磁珠在合成過(guò)程中表面修飾上了羧基基團(tuán)，在后??續(xù)的研宄中可以在不進(jìn)行其他修飾的情況下直接與抗體連接。??ｃ?Ｉ?ｒｉ??ｉ?．＾／Ｖ?ｉ??ｒ?，?ａ??｜?／＇，（〇〇??１?Ｖ；?ＣＯＯ?１３５０?ｃｍ１??｜?１６００?ｃｍ１??？?／??４０００?３０００?２０００?１０００??Ｗａｖｅ?ｎｕｍｂｅｒｓ?（ｃｍ?）??圖２－２?（Ａ）磁珠的透射電鏡圖；（Ｂ）磁珠被磁性分離的照片；（Ｃ）磁珠的紅外光??譜圖??Ｆｉｇ．?２－２?（Ａ）?Ｔｈｅ?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ＭＮＰｓ，?（Ｂ）?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｍａｇｎｅｔｉｃ??ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＭＮＰｓ?ｕｓｉｎｇ?ａ?ｐｅｒｍａｎｅｎｔ?ｍａｇｎｅｔ，?ａｎｄ?（Ｃ）?ｔｈｅ?ＦＴＩＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ＭＮＰｓ．??１７??

標(biāo)記量有助于提高該方法的靈敏度。當(dāng)一個(gè)磁珠隨樣液移動(dòng)到吸收墊，數(shù)十個(gè)負(fù)??載其上的蔗糖分子可以參與水解反應(yīng)，從而起到了放大信號(hào)的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，??磁珠標(biāo)記蔗糖酶時(shí)，所用的ＭＥＳ緩沖液的ｐＨ能夠直接影響標(biāo)記效率。如圖２－３Ａ??所示，葡萄糖傳感器測(cè)得的信號(hào)隨ｐＨ的降低而升高，且當(dāng)ｐＨ為４．２時(shí)信號(hào)最??大。分析認(rèn)為，蔗糖酶在低于或接近自身等電點(diǎn)時(shí)表現(xiàn)為正電荷，與磁珠表面的??負(fù)電荷羧基相互吸引，能夠促進(jìn)化學(xué)鍵的形成，因此選擇ＰＨ?４．２作為連接蔗糖??酶時(shí)的孵育ｐＨ。??該方法的靈敏度取決于磁珠表面連接蛋白的量，蛋白與磁珠的孵育時(shí)間會(huì)影??響蛋白的結(jié)合效率。本研究使用ＢＣＡ試劑盒測(cè)定偶聯(lián)過(guò)程中的蛋白結(jié)合率，結(jié)??果如圖２－３Ｂ所示，磁珠單獨(dú)與蔗糖酶和抗體連接時(shí)，僅需１?ｈ即可達(dá)到最大結(jié)??合率；連接過(guò)蔗糖酶的磁珠繼續(xù)連接抗體時(shí)，經(jīng)過(guò)３?ｈ結(jié)合率可以達(dá)到７０％并不??再升高。因此在制備雙功能化磁珠時(shí)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]金黃色葡萄球菌膠體金免疫層析試紙條的研制[D]. 牛帥.天津科技大學(xué) 2016
[2]阪崎腸桿菌膠體金免疫層析試紙條的制備及研究[D]. 歐靜堃.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3337198