麥芽低聚糖是一種功能性糖源,由2¹0個葡萄糖單元以α-1,4-糖苷鍵連接而成,具有良好的理化性質和特殊的生理功效,在食品及醫(yī)藥領域中有著越來越廣泛的應用。麥芽低聚糖生成酶（Maltooligosaccharide-forming amylase,MFA酶）是工業(yè)制備麥芽低聚糖的主要酶制劑。目前已有多種不同來源的MFA酶實現(xiàn)了異源表達,但分泌量普遍較低,限制了該酶的工業(yè)應用。同時,對MFA酶結構與功能的研究尚且有限,因此,研究其催化機制及構效關系對酶的深入研究和分子改造具有重要意義。本課題以來源于Pseudomonas saccharophila STB07的MFA酶(MFA_ps酶)為研究對象,首先,分別構建了MFA_ps酶的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和畢赤酵母表達系統(tǒng),實現(xiàn)了酶的胞外過表達。研究發(fā)現(xiàn),Bacillus subtilis WB600是表達MFA_ps酶的最佳體系,搖瓶培養(yǎng)72 h后發(fā)酵液酶活達144.60 U/mL,比文獻報道水平提高了13.7倍,比酶活為980.49 U/mg;MFA

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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MFA酶的水解模式

江南大學碩士學位論文FA 酶晶體結構的研究現(xiàn)狀 蛋白質的結晶與結構解析蛋白質的結晶對蛋白濃度和純度有極高的要求，必須建立在蛋白質實現(xiàn)高礎上。結晶是指蛋白質分子從過飽和溶液中析出，由隨機分布狀態(tài)轉變?yōu)榫w的過程，包括了晶核形成和晶體生長兩個過程[45]。通常，結晶方法可晶法、透析法、液相擴散法和氣相擴散法。結晶時最常用到的懸滴法(圖 1-相擴散法，將高濃度蛋白質溶液(10~200mg/mL)懸于沉淀劑溶液上方，在，通過密閉體系中蛋白質溶液蒸汽與沉淀劑溶液蒸汽的相互擴散而使蛋白接近過飽和狀態(tài)，當達到較高的飽和度時，蛋白質自發(fā)沉淀，堆棧形成晶體

圖 3-1 表達載體 mfaps/pET-20b(+)的構建Fig. 3-1 Construction of mfaps/pET-20b(+)圖 3-2 表達載體 mfaps/pET-20b(+)的酶切電泳驗證M：DNA 相對分子質量標準；1：Nde I 和 Xho I 雙酶切表達載體 mfaps/pET-20b(+)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]芽孢桿菌表達系統(tǒng)的特點及研究進展[J]. 苗苗,黃昆侖,梁志宏.  食品工業(yè)科技. 2017(18)
[2]枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)及其啟動子研究進展[J]. 余小霞,田健,劉曉青,伍寧豐.  生物技術通報. 2015(02)
[3]溫度對β-甘露聚糖酶在畢赤酵母中表達的影響[J]. 周洪波,林福來,鄭甲,郭寧,吳俊子,吳麗雙,邱冠周.  當代化工. 2013(04)
[4]畢赤酵母表達系統(tǒng)[J]. 韓雪清,劉湘濤,尹雙輝.  微生物學雜志. 2003(04)
[5]麥芽四糖的性質及在食品中的應用[J]. 朱明,吳嘉根.  冷飲與速凍食品工業(yè). 1999(04)

博士論文
[1]靜電相互作用對淀粉分支酶熱穩(wěn)定性影響的研究[D]. 班宵逢.江南大學 2017
[2]β-環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶在枯草桿菌中的分泌表達及其熱穩(wěn)定性研究[D]. 李才明.江南大學 2014
[3]軟化類芽孢桿菌α-環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶在大腸桿菌中的表達及其產物特異性分析[D]. 李兆豐.江南大學 2009

碩士論文
[1]軟化芽孢桿菌α-環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶在畢赤酵母和枯草桿菌中的表達[D]. 張佳瑜.江南大學 2010



本文編號：3322413