發(fā)布時間：2021-07-26 16:37

　　腸道是機體接觸外源微生物、毒素和其他抗原物質(zhì)的主要場所;正常情況下,外源有毒有害物質(zhì)受到腸粘膜屏障的阻隔無法通過腸腔進入機體內(nèi)部從而產(chǎn)生影響;一旦腸粘膜屏障受到損害將導(dǎo)致腸道功能異常,不同程度危及機體健康。牛乳鐵蛋白肽（lactoferricin bovine,LfcinB）是牛乳鐵蛋白在胃蛋白酶作用下酶解得到的一段含25個氨基酸殘基的多肽,其具有抗菌、抗病毒、抑制腫瘤細胞生長以及免疫調(diào)節(jié)等生理功能。目前對于LfcinB是否能通過改善腸粘膜屏障功能來維護腸道健康尚未見詳細報道。本研究基于腸粘膜屏障損傷的動物模型（含5%葡聚糖硫酸鈉飲水造模,5%DSS）和腸道類器官（organoid）模型,探討LfcinB在體內(nèi)外條件下對腸粘膜屏障的保護功能及相關(guān)機制。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:（1）LfcinB對腸粘膜屏障的保護作用研究。利用動物模型研究了LfcinB對腸粘膜機械、免疫、化學(xué)和微生物屏障的影響;實驗設(shè)對照C組、DSS組（5%DSS）、LfcinB組（5 mg/kg LfcinB）,LBD組（DSS+LfcinB）;實驗結(jié)果表明,LfcinB能夠顯著降低疾病活動指數(shù)（Disease act... 

【文章來源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

研究思路圖

牛乳鐵蛋白肽對腸粘膜屏障的保護作用及其機制研究15進行比較。在各個層級中，我們可以直觀的看到優(yōu)勢菌種的表達情況，及其在不同實驗處理后的變化趨勢。2)物種組成熱圖根據(jù)樣品相對豐度表，將各分類水平中相對豐度最高的20個群落組成數(shù)據(jù)，根據(jù)分類單元的豐度分布或樣本間的相似程度加以聚類，對聚類結(jié)果對分類單元和樣本分別排序，并通過熱圖加以呈現(xiàn)。通過聚類分析可以將高豐度和低豐度的分類單元加以區(qū)分，以顏色梯度及相似程度來反映在種水平和屬水平上各組結(jié)腸微生物群落組成的相似性和差異性。2.3.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)采用GraphPadPrism7.0軟件工具進行顯著性方差分析和進行繪圖，數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標準差表示，p<0.05為差異具有顯著性，p<0.01為差異極顯著（*表示p<0.05,**表示p<0.01，***表示p<0.001）。2.4結(jié)果與討論2.4.1牛乳鐵蛋白肽對腸炎大鼠組織形態(tài)的影響通過DAI指數(shù)、DAO含量、HE染色、透射電鏡等指標來分析牛乳鐵蛋白肽對腸炎大鼠腸組織形態(tài)和腸道通透性的影響，結(jié)果如圖2.1和2.2所示。圖2.1LfcinB對腸炎大鼠疾病活動指數(shù)（DAI）和二胺氧化酶（DAO）含量的影響A：DAI，B：DAO；*與C組比較，#與DSS組比較；n=8Fig.2.1EffectsofLfcinBonDAIandDAOlevelsinrats；A:DAI，B:DAO

牛乳鐵蛋白肽對腸粘膜屏障的保護作用及其機制研究16圖2.2LfcinB對腸炎大鼠組織形態(tài)的影響A：TEM，標尺=0.5μm，B：HE染色，標尺=200μmFig.2.2EffectofLfcinBontissuemorphologyinrats.A:TEM,scalebar:0.5μmB:HEstaining,scalebar:200μm通過每天監(jiān)測大鼠體重、大便狀態(tài)和糞便潛血情況，計算DAI指數(shù)。DAI結(jié)果顯示（圖2.1A）從第2天到第7天，LBD組和LfcinB組大鼠的大便比DSS組更結(jié)實，便血更少。DSS組大鼠第2~7天DAI值明顯高于C組和LBD組（p<0.05）。如圖2.1B所示，與對照C組（5.1±2.5ng/mL）相比，DSS組（38.4±9.6ng/mL）顯著提高血清中DAO濃度（p<0.01），而LBD組與DSS組相比血清中DAO濃度降低，LfcinB組與C組相比沒有顯著性差異。如圖2.2中HE染色和透射電鏡結(jié)果圖可看出，DSS組大鼠的宏觀炎癥程度明顯高于LfcinB組。與對照C組相比，DSS組HE染色顯示腸上皮層廣泛潰瘍、水腫、腸壁隱窩損傷、炎性細胞浸潤到腸粘膜；透射電鏡圖顯示，DSS組腸上皮緊密連接受損，絨毛破壞丟失；而LBD組相對來說有所改善。眾所周知，DAO可以反映腸道機械屏障的完整性和損傷程度。此外，DAO作為腸絨毛上皮細胞中的一種胞質(zhì)酶，血清中DAO濃度也常被用作腸粘膜完整性的標志[74]；腸道通透性減弱細菌及病原體能夠更多更快的進入道粘膜下層，從而加重炎癥，研究證明靜脈注射乳鐵蛋白和乳鐵蛋白肽樹狀聚合物后能夠使腫瘤消退[75]，這與乳鐵蛋白肽很強的抗菌性有關(guān)。綜上數(shù)據(jù)，可以看出與DSS組相比，LfcinB灌胃后腸炎大鼠腸道組織學(xué)損傷降低，疾病活動指數(shù)和DAO含量降低，說明牛乳鐵蛋白肽可以改善DSS誘導(dǎo)的腸炎導(dǎo)致的腸組織形態(tài)的損傷。2.4.2牛乳鐵蛋白肽對腸炎大鼠粘液及炎性浸潤的影響利用AB-PAS染色和CD68+免疫組化分析牛乳鐵蛋白肽對粘液分泌和巨噬細胞浸潤

【參考文獻】：
期刊論文
[1]IL-16通過促進巨噬細胞的M1型極化加重葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病[J]. 朱玉貞,戴軍,姚瀟穎,董冠軍,張惠,閆風(fēng)連,李春霞,李學(xué)慧,熊化保,司傳平.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2018(08)
[2]當歸對實驗性血虛便秘模型小鼠結(jié)腸組織形態(tài)和黏液分泌的影響[J]. 杜麗東,任遠,吳國泰,牛亭惠,王志旺,邵晶.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2018(04)
[3]BBI阻斷LPS對腸道上皮細胞間緊密連接蛋白的抑制作用[J]. 古俊,劉金彪,霍文哲.  中國感染控制雜志. 2018(03)
[4]腸道微生態(tài)與腸黏膜屏障研究進展[J]. 田慧,趙紅靚,楊琳,王娜.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2018(03)
[5]杯狀細胞及腸道黏液屏障的功能研究[J]. 黃春蘭,曾悅.  國際消化病雜志. 2017(06)
[6]基于葡聚糖硫酸鈉造模法研究潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制的進展[J]. 莊志奇,黃彪,吳巧鳳.  生物技術(shù)進展. 2017(06)
[7]魔芋低聚糖對結(jié)腸炎大鼠腸道菌群的影響[J]. 劉瑞雪,李勇超,張波.  中國食品學(xué)報. 2017(06)
[8]類器官及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J]. 李飛,高棟.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2017(04)
[9]牛乳鐵蛋白肽的抑菌功能及基因工程制備進展[J]. 張云威,蘇航,刁勇,戚智青.  生物技術(shù)進展. 2016(04)
[10]葡聚糖硫酸鈉致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的腸道微生態(tài)[J]. 韓曉霞,侯天舒,楊陽,趙紀嵐,吳巧鳳,余曙光.  世界華人消化雜志. 2012(35)

博士論文
[1]CAI對DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎之治療作用及其機理研究[D]. 陳瑋.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2017
[2]腸道菌群結(jié)構(gòu)變化與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究[D]. 王婷婷.上海交通大學(xué) 2012
[3]腸三葉因子對小鼠炎癥性腸病保護作用機制的研究[D]. 滕旭.中國醫(yī)科大學(xué) 2009

碩士論文
[1]結(jié)腸癌患者與結(jié)腸癌大鼠腸道菌群的比較分析[D]. 李俊媛.大連醫(yī)科大學(xué) 2017



本文編號：3303933