高級醇作為酒類釀造過程中的副產(chǎn)物,其含量多少對白酒的風(fēng)味和口感有重要影響。當(dāng)其含量過高時會使酒體苦澀、沖辣,而且對人體健康也會產(chǎn)生危害。因此,控制酒中高級醇的含量對釀酒行業(yè)的發(fā)展具有重大意義。本研究主要基于酶在非水相中催化正丙醇生成相應(yīng)醛、酮的原理,通過分離和純化得到一株能夠產(chǎn)丙醇脫氫酶的微生物,并對該酶的理化性質(zhì)進(jìn)行研究。在此基礎(chǔ)上,研究構(gòu)建了該酶的固定化酶和輔酶再生體系,為開發(fā)調(diào)控酒類中丙醇含量奠定基礎(chǔ)。結(jié)果如下:1.將前期從大曲、小曲及酒醅中分離的微生物,分別采用酶標(biāo)儀法和頂空氣相法進(jìn)行了初篩和復(fù)篩,挑選出既有乙醇耐受性,又能產(chǎn)丙醇脫氫酶的菌株10-F。對其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,鑒定結(jié)果顯示10-F屬于腸桿菌屬（Enterobacter Hormaeche and Edwards）。該菌株能夠在乙醇存在的條件下將丙醇轉(zhuǎn)化為丙醛,其最佳接種量為2%,最佳培養(yǎng)時間和轉(zhuǎn)速分別為12 h、130 r/min,最佳培養(yǎng)溫度以及最適生長pH分別為35℃C和7.0,該菌株的最大乙醇耐受濃度為12%。2.分別考察了不同乙醇濃度、不同反應(yīng)溫度、不同體系pH、不同金屬離子、不同培養(yǎng)基、不同底物以及不同... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 酒類中的高級醇
        1.1.1 酒類中高級醇簡介
        1.1.2 酒中高級醇的生成機(jī)理
    1.2 酒類高級醇含量調(diào)控的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 國內(nèi)研究現(xiàn)狀
        1.2.2 國外研究現(xiàn)狀
    1.3 醇脫氫酶
        1.3.1 概述
        1.3.2 醇脫氫酶的活性位點及其反應(yīng)機(jī)理
    1.4 本研究的主要內(nèi)容及創(chuàng)新點
        1.4.1 課題研究的內(nèi)容
        1.4.2 創(chuàng)新點
2 方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 實驗設(shè)計
        2.2.2 產(chǎn)酶菌種的篩選
        2.2.3 耐乙醇產(chǎn)酶菌種的篩選
        2.2.4 產(chǎn)酶菌種的鑒定及生長曲線測定
        2.2.5 產(chǎn)酶菌培養(yǎng)條件優(yōu)化
        2.2.6 醇脫氫酶粗酶液制備
        2.2.7 丙醇脫氫酶的純化
        2.2.8 醇脫氫酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        2.2.9 酶固定化及相對酶活力測定
        2.2.10 輔酶再生實驗
        2.2.11 固定化丙醇脫氫酶在啤酒和紅葡萄酒中的應(yīng)用
3 結(jié)果與討論
    3.1 產(chǎn)酶菌種篩選、鑒定及其培養(yǎng)條件研究
        3.1.1 產(chǎn)酶菌株初篩
        3.1.2 產(chǎn)酶菌株復(fù)篩
        3.1.3 添加乙醇對酶活力的影響
        3.1.4 耐乙醇產(chǎn)酶菌株的分子生物學(xué)鑒定
        3.1.5 10-F培養(yǎng)條件研究
    3.2 丙醇脫氫酶的提取及純化
        3.2.1 Sephadex G-100柱色譜洗脫曲線
        3.2.2 SDS-PAGE電泳鑒定分析
    3.3 醇脫氫酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        3.3.1 醇脫氫酶的Km、Vmax
            3.3.1.1 酶對不同醇類的催化結(jié)果
        3.3.2 反應(yīng)體系pH對酶活的影響
        3.3.3 反應(yīng)溫度對酶活的影響
        3.3.4 不同培養(yǎng)基對酶活的影響
        3.3.5 金屬離子對酶活的影響
        3.3.6 乙醇濃度梯度對酶活的影響
        3.3.7 不同輔酶因子對酶活的影響
    3.4 酶固定化及輔酶再生實驗
        3.4.1 丙醇脫氫酶、輔酶固定化條件研究
        3.4.2 輔酶再生實驗
    3.5 固定化丙醇脫氫酶在啤酒和紅葡萄酒中的應(yīng)用
        3.5.1 固定化酶在啤酒中的應(yīng)用
        3.5.2 固定化酶在紅葡萄酒中的應(yīng)用
4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]液態(tài)法大曲酒發(fā)酵過程中高級醇影響因素的研究[J]. 王亞平,邢爽,孫中貫,肖冬光.  天津科技大學(xué)學(xué)報. 2019(05)
[2]釀酒酵母高級醇合成路徑及關(guān)鍵基因[J]. 劉燦珍,秦偉帥,孫玉霞,趙新節(jié).  中國釀造. 2018(08)
[3]補(bǔ)加可同化氮對冰酒發(fā)酵的影響[J]. 張雪,郭在力,俞志敏,張平,孫玉梅.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(05)
[4]黃酒中高級醇含量控制與檢測研究進(jìn)展[J]. 黃桂東,吳子鎣,唐素婷,馮結(jié)鏵,鐘先鋒.  中國釀造. 2018(01)
[5]頂空氣相色譜法測定中藥酒劑中甲醇、乙酸乙酯、正丙醇、正丁醇、仲丁醇、異丁醇和異戊醇[J]. 竇曉蓉,王振華,杜勤,孫麗娜,武肖云,張志強(qiáng).  中藥新藥與臨床藥理. 2017(02)
[6]降低白酒中高級醇含量的研究進(jìn)展[J]. 茍靜瑜,賈智勇,閆宗科,杜杰.  釀酒. 2016(04)
[7]發(fā)酵酒中高級醇的研究進(jìn)展[J]. 曾朝珍,張永茂,康三江,張霽紅,張芳,張海燕.  中國釀造. 2015(05)
[8]釀造用酶影響白酒中高級醇生成的研究進(jìn)展[J]. 劉明艷,錢沖,廖永紅.  釀酒科技. 2015(05)
[9]醬香型白酒間歇式投糧工藝的研究[J]. 李林光,沈才洪,張洪遠(yuǎn),敖宗華,吳華昌,李明,彭英,王貴軍,任劍波.  釀酒科技. 2014(08)
[10]醬香型白酒發(fā)酵中酵母群落結(jié)構(gòu)及其對風(fēng)味組分的影響[J]. 邵明凱,王海燕,徐巖,聶堯.  微生物學(xué)通報. 2014(12)

碩士論文
[1]產(chǎn)醬香功能芽孢桿菌的篩選及濃醬兼香型白酒復(fù)合功能強(qiáng)化曲的研究[D]. 王霜.武漢輕工大學(xué) 2017
[2]葡萄酒酵母高級醇代謝相關(guān)基因的研究[D]. 劉學(xué)強(qiáng).天津科技大學(xué) 2016
[3]擬南芥乙醇脫氫酶純化及酶學(xué)性質(zhì)研究[D]. 胡濤.浙江農(nóng)林大學(xué) 2015
[4]羧基化二氧化硅納米粒子的制備及其對酶及輔酶固定化的研究[D]. 孫麗衛(wèi).北京化工大學(xué) 2012
[5]黃酒中高級醇含量控制的工藝研究[D]. 張興亞.浙江工商大學(xué) 2012
[6]金屬酶催化乙醇氧化生成乙醛反應(yīng)機(jī)理的理論研究[D]. 李曉瑩.遼寧師范大學(xué) 2010
[7]反膠束體系在酶法測定和生物分離中的應(yīng)用研究[D]. 何進(jìn)星.中南民族大學(xué) 2009



本文編號：3172328