發(fā)布時間：2021-04-23 20:39

　　據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟（IDF）最新公布的數(shù)據(jù),截止到2019年,我國糖尿病患者約為1.164億人,已成為全球患病人數(shù)最多的國家。2型糖尿�。═2DM）在糖尿病人群中所占比例高達90%,其可誘發(fā)心血管疾病、腎病、視網(wǎng)膜病變以及神經(jīng)病變等并發(fā)癥,給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟負擔。T2DM并非終身性慢性疾病,可通過適當?shù)纳攀掣深A得到有效的預防和改善。因此,開發(fā)天然、安全、高效的食品功能因子以替代傳統(tǒng)藥物對T2DM進行膳食干預具有十分重要的現(xiàn)實意義。我國核桃資源豐富,分離自核桃仁蛋白的核桃蛋白酶解物（WHPs,3-10kDa）已被證實具有降血糖活性,但活性肽的結構和在關鍵調控中的作用機理有待進一步明確。本文主要對核桃活性肽的制備、純化、結構鑒定及降血糖活性進行了系統(tǒng)研究。主要研究結果如下:（1）在完成WHPs（3-10kDa）Sephadex G25和Sephadex G15葡聚糖凝膠分離純化的基礎上,采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）對核桃水解肽進一步分離純化,得到單一組分F1。利用電噴霧串聯(lián)質譜（ESI-MS/MS）技術對組分F1進行結構鑒定,共獲得432種具有不同氨基酸序列的活性肽。根... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 選題來源
    1.2 核桃概述
        1.2.1 核桃的營養(yǎng)價值
        1.2.2 核桃的生理功能
        1.2.3 核桃多肽的研究進展
    1.3 糖尿病的概述
        1.3.1 糖尿病的定義
        1.3.2 糖尿病的分類與癥狀
        1.3.3 T2DM的治療藥物
        1.3.4 T2DM與氧化應激的關系
    1.4 IRS-1/PI3K/Akt信號通路
    1.5 AMPK信號通路
    1.6 論文研究目的與意義
    1.7 論文研究的主要內容
    1.8 創(chuàng)新點
    1.9 實驗技術路線
第二章 核桃降血糖活性肽的分離純化及結構鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 實驗原料
            2.1.1.2 試劑
            2.1.1.3 儀器與設備
        2.1.2 方法
            2.1.2.1 RP-HPLC分離純化
            2.1.2.2 ESI-MS/MS結構鑒定
            2.1.2.3 降血糖活性肽的合成
    2.2 結果
        2.2.1 核桃降血糖活性肽的RP-HPLC色譜
        2.2.2 核桃降血糖活性肽的ESI-MS/MS結構鑒定
        2.2.3 核桃降血糖活性肽的固相合成
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 核桃活性肽的降血糖及抗氧化活性研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
            3.1.1.1 實驗原料
            3.1.1.2 試劑
            3.1.1.3 儀器與設備
        3.1.2 方法
            3.1.2.1 α-葡萄糖苷酶抑制率
            3.1.2.2 α-淀粉酶抑制率
            3.1.2.3 氧自由基吸收能力（ORAC）
            3.1.2.4 HepG2細胞培養(yǎng)
            3.1.2.5 核桃活性肽對HepG2細胞活力的影響（MTT法）
            3.1.2.6 IR HepG2細胞模型的建立
            3.1.2.7 核桃活性肽對IR HepG2細胞模型葡萄糖消耗量的測定
            3.1.2.8 核桃活性肽對IR HepG2細胞模型抗氧化能力的測定
            3.1.2.9 統(tǒng)計分析
    3.2 結果
        3.2.1 核桃活性肽對α-葡萄糖苷酶抑制率驗證
        3.2.2 核桃活性肽對α-淀粉酶抑制率驗證
        3.2.3 核桃活性肽的氧自由基吸收能力（ORAC）
        3.2.4 核桃活性肽對HepG2細胞活力的影響
        3.2.5 IR HepG2細胞模型的建立
        3.2.6 核桃活性肽對IR HepG2細胞模型葡萄糖消耗量的影響
        3.2.7 核桃活性肽對IR HepG2細胞模型抗氧化活性的影響
    3.3 討論
    3.4 小結
第四章 核桃活性肽對IR HepG2細胞葡萄糖代謝的影響及調控機制
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
            4.1.1.1 實驗原料
            4.1.1.2 試劑
            4.1.1.3 儀器與設備
        4.1.2 方法
            4.1.2.1 細胞總蛋白提取
            4.1.2.2 蛋白免疫印跡（Western Blot）測定蛋白表達
            4.1.2.3 高碘酸-Schiff（PAS）糖原染色法
            4.1.2.4 GLUT4免疫熒光染色
            4.1.2.5 統(tǒng)計分析
    4.2 結果
        4.2.1 LPLLR通過促進IR HepG2細胞中GLUT4的表達和易位來改善葡萄糖攝取
        4.2.2 LPLLR通過上調IR HepG2細胞中的p-GSK-3β促進糖原合成
        4.2.3 LPLLR通過下調與IR HepG2細胞糖異生有關的酶和轉錄因子來抑制肝臟糖異生
        4.2.4 LPLLR通過激活IR HepG2細胞中的IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信號通路來改善IR
        4.2.5 LPLLR對IR HepG2細胞中IRS-1/PI3K/Akt和AMPK信號通路的總結
    4.3 討論
    4.4 小結
第五章 核桃活性肽LPLLR的穩(wěn)定性研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 材料
            5.1.1.1 實驗原料
            5.1.1.2 試劑
            5.1.1.3 儀器與設備
        5.1.2 方法
            5.1.2.1 LPLLR的熱穩(wěn)定性分析
            5.1.2.2 LPLLR的酸堿穩(wěn)定性分析
            5.1.2.3 LPLLR的模擬胃腸道消化穩(wěn)定性分析
            5.1.2.4 統(tǒng)計分析
    5.2 結果
        5.2.1 LPLLR的熱穩(wěn)定性分析結果
        5.2.2 LPLLR的酸堿穩(wěn)定性分析結果
        5.2.3 LPLLR的模擬胃腸道消化穩(wěn)定性分析結果
    5.3 討論
    5.4 小結
結論
參考文獻
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]核桃的營養(yǎng)保健功能及功能成分研究進展[J]. 李俊南,習學良,熊新武,楊建華,張雨思.  中國食物與營養(yǎng). 2018(05)
[2]核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸組成特性研究[J]. 李漢洋,李建杰,王帥,徐興華,藍文言,梁宇鵬,張珍蘭,榮瑞芬.  食品工業(yè)科技. 2018(13)
[3]我國核桃起源問題探究[J]. 王根憲.  西北園藝(果樹). 2015(06)
[4]山核桃營養(yǎng)價值與種植經(jīng)濟效益分析[J]. 李新委,謝世友,馬燕.  農(nóng)學學報. 2015(02)
[5]長白山核桃球蛋白的提取、分離純化及其功能性質研究[J]. 王曉飛,閔偉紅,朱運明,劉春雷,吳丹,崔玲玉,劉景圣.  現(xiàn)代食品科技. 2015(04)
[6]核桃多肽對D-半乳糖誘導老年小鼠血脂水平的影響[J]. 楊子明,劉金磊,顏小捷,李典鵬.  食品科學. 2015(09)
[7]食用核桃可降低糖尿病風險[J]. 陳錚.  中國食品學報. 2013(04)
[8]核桃多肽功能特性的研究[J]. 姜莉,徐懷德,陳金海.  食品科技. 2013(01)
[9]核桃油、紫蘇油、α-亞麻酸、亞油酸對大鼠學習記憶的影響[J]. 陳亮,王麗梅,郭艷芬,肖娜,陶興無,劉志國,劉大川,劉烈炬.  中國油脂. 2011(10)
[10]核桃多肽的制備及核桃多肽酒的研制[J]. 姜莉,徐懷德,陳金海,姜晨曦,何玉君.  食品科學. 2009(08)

博士論文
[1]玉米抗氧化肽活性氧清除作用與抗氧化基因表達調節(jié)作用研究[D]. 王麗英.吉林大學 2018
[2]β酪啡肽在大鼠胃腸道內的釋放、吸收和穩(wěn)定特性及其對胃腸機能的影響[D]. 宗亞峰.南京農(nóng)業(yè)大學 2007
[3]苦瓜降糖多肽-P的分離純化及降糖機理研究[D]. 盛清凱.江南大學 2005

碩士論文
[1]降血糖活性肽制備及抑制α-葡萄糖苷酶活性肽純化與鑒定[D]. 趙紅星.哈爾濱工業(yè)大學 2018
[2]亞麻籽抗氧化肽制備、活性鑒定及降血糖研究[D]. 王惠敏.福州大學 2018
[3]核桃生物活性評價及其乳劑制備工藝研究[D]. 李麗琪.武漢工程大學 2017
[4]核桃多肽降血糖功能效果研究[D]. 杜侃瑩.吉林農(nóng)業(yè)大學 2017
[5]核桃多肽防治糖尿病物質基礎及作用機制研究[D]. 李麗.武漢工程大學 2016
[6]漢麻籽粕降血糖肽的酶法制備及其分離純化[D]. 梁凱.華南理工大學 2014
[7]T3對氧化應激誘導的HepG2細胞氧化還原狀態(tài)及糖代謝的影響[D]. 陳立立.江南大學 2014
[8]啤酒糟多肽的分離純化及降血糖活性研究[D]. 田應娟.華南理工大學 2011
[9]醋蛋酶解產(chǎn)物生物活性成分的研究[D]. 陳黎斌.江南大學 2006



本文編號：3156003