脂代謝紊亂會(huì)對(duì)人體造成許多危害,如引起高血脂,脂肪肝等。蕎麥?zhǔn)且环N藥食同源的傳統(tǒng)作物,對(duì)肥胖、高血糖和高血脂等代謝性疾病具有良好的預(yù)防作用,蕎麥胰蛋白酶抑制劑（Buckwheat trypsin inhibitor,BTI）是從蕎麥中提取的一種低分子量蛋白質(zhì)。本研究采用秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans,C.elegans）作為模型,檢測(cè)了重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑（recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI）對(duì)線蟲脂肪積累的影響,并初步研究了其作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.rBTI對(duì)秀麗隱桿線蟲脂肪積累的影響。采用尼羅紅染色及甘油三酯測(cè)定檢測(cè)脂肪變化情況,結(jié)果顯示,在2.5-10μM濃度范圍內(nèi),rBTI可以降低野生型線蟲脂肪積累,并且呈現(xiàn)一定濃度依賴效應(yīng)。與對(duì)照相比,10μM rBTI處理的線蟲體內(nèi)脂肪積累減少了37.82%,甘油三酯減少了47.51%。用0.75%葡萄糖建立高脂模型線蟲,研究rBTI對(duì)線蟲脂肪積累的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在高脂模型線蟲中,經(jīng)rBTI處理后,線蟲脂肪積累減少了38.6%,甘油三酯減少了3... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

rBTI結(jié)構(gòu)模型.Fig.1.1StructuremodelofrBTI.Differentcolorsrepresentdifferentstructuralelements,andthe

重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑減少C.elegans脂肪積累機(jī)制4數(shù)分裂和發(fā)育模式的研究之后，人們對(duì)C.elegans的基因圖譜進(jìn)行了繪制，進(jìn)行了全基因組測(cè)序。此后，世界范圍內(nèi)的線蟲研究者們都能做到信息共享，使得線蟲研究擁有一個(gè)持續(xù)更新的良好的信息平臺(tái)，如wormbase，從而奠定了C.elegans用于進(jìn)化生物學(xué)和生態(tài)學(xué)研究的重要地位。在實(shí)驗(yàn)室20℃條件下，C.elegans的生命過程經(jīng)歷從蟲卵、L1-L4及成蟲階段，僅需大約3天時(shí)間。在L1期至L2期過程中，當(dāng)線蟲生長環(huán)境發(fā)生變化，比如食物缺乏、線蟲過多等導(dǎo)致不適宜線蟲生長時(shí)，線蟲就會(huì)進(jìn)入dauer期，不再生長，待環(huán)境合適時(shí)，重新進(jìn)入生長發(fā)育至L4期（圖1.2）。與傳統(tǒng)的動(dòng)物模型相比，線蟲作為模式生物有許多優(yōu)點(diǎn)：體型小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成年線蟲體長大約為1mm，體內(nèi)僅含五對(duì)性染色體和一對(duì)常染色體；容易繁殖，產(chǎn)卵量大，每條線蟲產(chǎn)卵約200-300個(gè)；容易保存，像細(xì)胞一樣，線蟲可以在液氮條件下保存，復(fù)蘇時(shí)只需在常溫下化開，倒在培養(yǎng)基上即可；生命周期短，20℃條件下線蟲平均健康壽命為20d左右；研究成本低；突變株易得，目前研究者們可以獲得超過4000種線蟲突變品系；完全測(cè)序；與人類疾病相關(guān)的基因達(dá)到65%以上[38]；信號(hào)通路在哺乳動(dòng)物中也相對(duì)保守。這些特征使C.elegans成為研究老化和神經(jīng)退行性疾病研究的動(dòng)物模型，如阿爾茨海默氏癥和帕金森病等。研究者們利用C.elegans探究了許多物質(zhì)的有益效應(yīng)，Chen等[39]以C.elegans為模型，得出二甲基雙胍可延長秀麗隱桿線蟲壽命的結(jié)論；張等人[40]以C.elegans為模型，探究了連翹花黃色素的抗氧化效果；Pawanrat等人[41]通過對(duì)線蟲的研究指出，海參提取物有抗帕金森癥的可能性。圖1.220℃條件下秀麗隱桿線蟲生命周期Fig.1.2C.eleganslifecycleat20C

重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑減少C.elegans脂肪積累機(jī)制6作用從酵母、線蟲到人類高度保守，較為復(fù)雜，調(diào)控過程需要眾多分子和物質(zhì)參與。IIS信號(hào)通路中，DAF-2和DAF-16是參與IIS途徑調(diào)節(jié)脂肪代謝的最重要組分，DAF-2是線蟲中類胰島素的唯一受體，位于細(xì)胞膜上。胰島素樣配體與DAF-2受體結(jié)合后，導(dǎo)致其自磷酸化，使AGE-1/PI3K激酶活化[50]，激活PDK-1和AKT-激酶，最終磷酸化DAF-16，阻止其從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移，從而阻止對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)控[51,52]。圖1.3脂肪代謝信號(hào)通路圖Fig.1.3FatmetabolismsignalpathwayIIS途徑有三個(gè)主要轉(zhuǎn)錄因子，叉頭蛋白（Forkheadboxprotein，F(xiàn)OXO）家族轉(zhuǎn)錄因子DAF-16，熱休克蛋白轉(zhuǎn)錄因子HSF-1和Nrf家族轉(zhuǎn)錄因子SKN-1。FOXO家族轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控許多生物生長發(fā)育、新陳代謝、應(yīng)激應(yīng)答、細(xì)胞循環(huán)及壽命[53]。在線蟲中，DAF-16是哺乳動(dòng)物FOXO3的同源體，它在DAF-2和AGE-1的下游，并受到二者的負(fù)調(diào)控。DAF-16在正常狀態(tài)下，活性較低，當(dāng)編碼基因突變時(shí)，會(huì)發(fā)生去磷酸化而進(jìn)入細(xì)胞核，可以直接對(duì)生物代謝過程產(chǎn)生影響，也可以對(duì)通過調(diào)控與代謝過程相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平間接影響代謝過程，造成IIS通路下調(diào)[54]。HSF-1可感


本文編號(hào)：3116375