金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SP）作為食源性致病菌在自然界中廣泛存在,其易污染肉制品、蔬菜等食品。由于缺乏有效、快速和可視化的檢測方法,金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件時有發(fā)生。故亟需建立一種快速、靈敏可大批量應(yīng)用的檢測方法。目前,關(guān)于金黃色葡萄球菌的檢測方法普遍存在周期較長,設(shè)備昂貴,不利于基層現(xiàn)場大批量檢測等不足。免疫磁分離（Immunomagnetic separation,IMS）方法可顯著濃縮目的細菌,降低食品基質(zhì)和雜菌對于后期檢測的干擾,提高檢測效率。重組酶聚合酶擴增技術(shù)（Recombinase polymerase amplification,RPA）具有快速、便捷、高效和廉價等優(yōu)點。本研究建立了一種基于免疫磁分離的金黃色葡萄球菌RPA-LF（Lateral flow,LF）快速檢測技術(shù),為金黃色葡萄球菌的檢測提供新的技術(shù)方案。為了制備可用于金黃色葡萄球菌檢測的特異性單抗,本研究將甲醛滅活的4株不同來源的金黃色葡萄球菌（ATCC6538、ATCC29213、CMCC26003和SH001）等量混合物作為全菌免疫原,免疫BALB/c小鼠。采集... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基于單壁碳納米管檢測及黃色葡萄球菌的傳感器制備原理圖

1.2.2 磁珠的應(yīng)用1.2.2.1 細菌分離免疫磁珠分離技術(shù)被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)中的細菌分離(圖1-2)。磁珠偶聯(lián)抗體的方式分為直接偶聯(lián)法和間接偶聯(lián)法。直接偶聯(lián)法是指抗體共價結(jié)合在羧基磁珠表面。首先將磁珠表面上的羧基活化，再將抗體與磁珠表面的羧基共價反應(yīng)。這一類型的磁珠效果穩(wěn)定，但制備過程略復(fù)雜。間接偶聯(lián)法分兩種模式：其一，磁珠表面偶聯(lián)二抗，在通過二抗與特異性抗體的結(jié)合，將抗體間接偶聯(lián)在磁珠上(Datta, et al., 2008 Chunglok, et al., 2011)；其二，磁珠表面偶聯(lián)鏈霉親和素，再與標記生物素的抗體結(jié)合，制備免疫磁珠(Zhu, et al., 2011)。這一制備過程簡單，但獲得的磁珠性能不穩(wěn)定。目前在食源性病原微生物檢測方面，主要是將免疫磁珠分離技術(shù)與顯色培養(yǎng)基、PCR技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)或流式細胞技術(shù)等檢測方法結(jié)合起來應(yīng)用。Taha等(Taha, et al., 2010)將免疫磁分離技術(shù)與顯色培養(yǎng)基檢測集合起來進行雞肉中沙門氏菌的檢測，其檢測限可至1.6CFU/mL。Cadirci等( ad rc , et al., 2010)將免疫磁分離技術(shù)與多重PCR結(jié)合起來分離牛肉樣品中的大腸桿菌O157：H7

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言8圖1-3 目前常用的幾種RPA設(shè)備Fig 1-3 Several commonly used RPA devices1.3.2 RPA 的原理RPA的基本反應(yīng)機制同活細胞體內(nèi)的基因同源重組類似(圖1-4)。標準RPA反應(yīng)包括三種關(guān)鍵蛋白(重組酶UvsX、單鏈結(jié)合蛋白Gp32、鏈置換DNA聚合酶Bsu)和一種輔助蛋白UvsY。首先，UvsX蛋白在UvsY的輔助下與引物結(jié)合，形成核蛋白復(fù)合體，由此產(chǎn)生的復(fù)合物在雙鏈DNA中搜索同源序列。一旦同源序列被定位，復(fù)合物即侵入雙鏈DNA，形成D-loop型結(jié)構(gòu)。在D-loop型結(jié)構(gòu)一邊，引物與模板鏈雜交，引發(fā)鏈置換反應(yīng)。而另一邊以單鏈DNA形式存在，單鏈結(jié)合蛋白Gp32結(jié)合在此單鏈上使其處于穩(wěn)定狀態(tài)(Yonesaki and Minagawa, 1985 Harris and Griffith, 1987)。隨后，重組酶UvsX從核蛋白復(fù)合體上脫離

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本文編號：3116161