金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SP）作為食源性致病菌在自然界中廣泛存在,其易污染肉制品、蔬菜等食品。由于缺乏有效、快速和可視化的檢測方法,金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件時有發(fā)生。故亟需建立一種快速、靈敏可大批量應用的檢測方法。目前,關于金黃色葡萄球菌的檢測方法普遍存在周期較長,設備昂貴,不利于基層現(xiàn)場大批量檢測等不足。免疫磁分離（Immunomagnetic separation,IMS）方法可顯著濃縮目的細菌,降低食品基質和雜菌對于后期檢測的干擾,提高檢測效率。重組酶聚合酶擴增技術（Recombinase polymerase amplification,RPA）具有快速、便捷、高效和廉價等優(yōu)點。本研究建立了一種基于免疫磁分離的金黃色葡萄球菌RPA-LF（Lateral flow,LF）快速檢測技術,為金黃色葡萄球菌的檢測提供新的技術方案。為了制備可用于金黃色葡萄球菌檢測的特異性單抗,本研究將甲醛滅活的4株不同來源的金黃色葡萄球菌（ATCC6538、ATCC29213、CMCC26003和SH001）等量混合物作為全菌免疫原,免疫BALB/c小鼠。采集... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

基于單壁碳納米管檢測及黃色葡萄球菌的傳感器制備原理圖

1.2.2 磁珠的應用1.2.2.1 細菌分離免疫磁珠分離技術被廣泛應用于復雜基質中的細菌分離(圖1-2)。磁珠偶聯(lián)抗體的方式分為直接偶聯(lián)法和間接偶聯(lián)法。直接偶聯(lián)法是指抗體共價結合在羧基磁珠表面。首先將磁珠表面上的羧基活化，再將抗體與磁珠表面的羧基共價反應。這一類型的磁珠效果穩(wěn)定，但制備過程略復雜。間接偶聯(lián)法分兩種模式：其一，磁珠表面偶聯(lián)二抗，在通過二抗與特異性抗體的結合，將抗體間接偶聯(lián)在磁珠上(Datta, et al., 2008 Chunglok, et al., 2011)；其二，磁珠表面偶聯(lián)鏈霉親和素，再與標記生物素的抗體結合，制備免疫磁珠(Zhu, et al., 2011)。這一制備過程簡單，但獲得的磁珠性能不穩(wěn)定。目前在食源性病原微生物檢測方面，主要是將免疫磁珠分離技術與顯色培養(yǎng)基、PCR技術、免疫學技術、電化學技術或流式細胞技術等檢測方法結合起來應用。Taha等(Taha, et al., 2010)將免疫磁分離技術與顯色培養(yǎng)基檢測集合起來進行雞肉中沙門氏菌的檢測，其檢測限可至1.6CFU/mL。Cadirci等( ad rc , et al., 2010)將免疫磁分離技術與多重PCR結合起來分離牛肉樣品中的大腸桿菌O157：H7

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 引言8圖1-3 目前常用的幾種RPA設備Fig 1-3 Several commonly used RPA devices1.3.2 RPA 的原理RPA的基本反應機制同活細胞體內的基因同源重組類似(圖1-4)。標準RPA反應包括三種關鍵蛋白(重組酶UvsX、單鏈結合蛋白Gp32、鏈置換DNA聚合酶Bsu)和一種輔助蛋白UvsY。首先，UvsX蛋白在UvsY的輔助下與引物結合，形成核蛋白復合體，由此產(chǎn)生的復合物在雙鏈DNA中搜索同源序列。一旦同源序列被定位，復合物即侵入雙鏈DNA，形成D-loop型結構。在D-loop型結構一邊，引物與模板鏈雜交，引發(fā)鏈置換反應。而另一邊以單鏈DNA形式存在，單鏈結合蛋白Gp32結合在此單鏈上使其處于穩(wěn)定狀態(tài)(Yonesaki and Minagawa, 1985 Harris and Griffith, 1987)。隨后，重組酶UvsX從核蛋白復合體上脫離

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]高響應性磁性微球的制備及其生物分離應用[D]. 曹菁菁.天津大學 2009



本文編號：3116161