本實(shí)驗(yàn)室近年來對(duì)于云南松（Pinus yunnanensis）花粉生理功能的研究主要集中于松花粉的多糖和營(yíng)養(yǎng)成分豐富的內(nèi)容物,并發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種疾病和癌癥的發(fā)生具有預(yù)防和抑制作用。而松花粉壁在花粉中占比近40%,主要成分為纖維素和孢粉素。目前已有大量對(duì)于膳食纖維通過腸道菌群改善機(jī)體代謝的研究,但對(duì)于松花粉壁改善機(jī)體代謝的探究還尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用提純的松花粉壁喂養(yǎng)小鼠,探究它對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝和血脂異常的有益作用。一、通過對(duì)于提取試劑和條件的優(yōu)化,最終利用α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶處理,并用乙醇、水分別洗滌三次,獲得了不含蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等營(yíng)養(yǎng)成分的純度較高的松花粉壁,得率約為43.75%,主要成分為纖維素和孢粉素,其中纖維素約占41.80%,用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。二、利用C57BL/6雄性小鼠建立高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝和血脂異常模型（MC）,同時(shí)設(shè)置對(duì)照組（HC）、含2.5%松花粉壁的實(shí)驗(yàn)組（PW）和含2.5%大豆膳食纖維的陽(yáng)性對(duì)照組（FC）,喂養(yǎng)小鼠42天后取其肝臟、血清、腎周和附睪脂肪,測(cè)定其體脂比、肝指數(shù)、血脂水平、炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6,觀察肝臟病理... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Pinusrigida孢粉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)單元[5]

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖2-1松花粉壁處理前后的電鏡圖（左側(cè)為破壁松花粉，右側(cè)為提取獲得的松花粉壁）Figure2-1SEMmicrographofpinepollenwallbeforeandaftertreatment(TheleftisthePinePollenDisruptionPowder,andtherightisthepinepollenwallobtainedfromextraction)2.4.2松花粉壁的得率為了獲得更為干凈的松花粉壁，我們對(duì)松花粉壁的提取過程進(jìn)行了不斷的優(yōu)化，并將松花粉壁的得率作為其純度的判斷依據(jù)之一。在用常溫蒸餾水、乙醇分別洗滌三次后，計(jì)算其得率為53.5%；將蒸餾水加熱后用于洗滌，使松花粉壁的得率降低至52.6%；在洗滌之前依次加入α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶處理，再用熱蒸餾水和乙醇洗滌，使松花粉壁的得率降至了43.75%。這也說明簡(jiǎn)單的洗滌并不能完全除去松花粉內(nèi)和嵌在花粉壁中的內(nèi)容物，而經(jīng)過淀粉酶和蛋白酶的降解可將更多殘留的內(nèi)容物洗出。2.4.3松花粉壁的營(yíng)養(yǎng)成分為了了解松花粉壁在提取方法的優(yōu)化過程中，其中營(yíng)養(yǎng)成分的變化，并驗(yàn)證最終的提取方法是否將松花粉的內(nèi)容物去除干凈，我們對(duì)蛋白質(zhì)、還原糖和脂肪的含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過水提內(nèi)容物和簡(jiǎn)單的洗滌對(duì)蛋白質(zhì)的含量基本沒有影響，當(dāng)經(jīng)過蛋白酶的降解后，蛋白質(zhì)的含量大幅降低。還原糖在水提內(nèi)容物的過程中已被大部分除去，在經(jīng)過洗滌和酶處理后，松花粉中的還原糖基本上已被去除干凈。脂肪在經(jīng)過乙醇洗滌后含量大幅度降低，基本也被去除干凈。從表2-1中我們可以看出，經(jīng)過洗滌和酶處理的松花

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文283.3.6肝臟組織切片和形態(tài)學(xué)分析取小鼠新鮮肝臟后立即放入固定液中固定，經(jīng)包埋、制片、HE染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察，并拍攝對(duì)應(yīng)主要描述中不同種類的病變部位。取小鼠新鮮肝臟，修剪成小塊，經(jīng)包埋、冰凍后用冰凍切片機(jī)切片，粘附與載玻片上，-20℃冷凍保存。對(duì)切片進(jìn)行油紅O染色，取出切片干燥，于油紅O染液中浸染脂肪，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝。3.3.7數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。通過t檢驗(yàn)和單向方差分析（ANOVA）進(jìn)行了組間差異分析。P值<0.05的差異被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.4.1松花粉壁對(duì)小鼠體重體脂和肝指數(shù)的影響每?jī)商鞂?duì)小鼠進(jìn)行一次稱重，各組小鼠的平均體重變化如圖3-1所示：圖3-1小鼠體重變化圖Figure3-1MousebodyweightchangediagramHC組的小鼠體重在前兩周上升較快，在兩周后趨于平穩(wěn)，終體重為23.591g。MC組、PW組和FC組小鼠的體重在喂養(yǎng)開始的第二天出現(xiàn)了輕微的下降，并在之后的六周緩慢的上升，趨勢(shì)接近，終體重如表3-1所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3104308