牡蠣肉味道鮮美,營養(yǎng)價值極高,素有“根之源”、“海中牛奶”的美稱,據(jù)典籍記載牡蠣肉具有增強男性性功能的潛在藥用價值。牡蠣多肽也具備良好的生物活性,對應(yīng)用于改善性功能食品的開發(fā)有著巨大的潛能。隨著社會人口老齡化趨勢加劇、生活壓力增大、環(huán)境污染加劇、民眾運動意識薄弱等問題的出現(xiàn),睪酮缺乏性疾病的發(fā)病率逐年增高。睪酮作為最主要的雄激素,對維持肌肉質(zhì)量和強度、性欲及勃起次數(shù)等起著關(guān)鍵作用,睪酮缺乏會對男性各器官系統(tǒng)的發(fā)育造成嚴重的影響。本文運用酶解法制備太平洋牡蠣活性肽,對其進行分離純化,并評價了其促進小鼠體外睪酮分泌活性。主要研究結(jié)果如下:（1）采用16s rRNA基因檢測方法對原料牡蠣進行物種鑒定,利用BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）方法,將最后得到的基因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行比對,和太平洋牡蠣16s rRNA基因序列的吻合度達到100%,通過實驗證實所采用的原料為太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）。（2）通過單因素實驗,以多肽得率為指標,考察不同加酶量、pH值、酶解溫度、酶解時間對多肽得率的影響,根據(jù)單因素實驗結(jié)果進行正交... 

【文章來源】：廣東海洋大學廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 太平洋牡蠣的研究概述
    1.2 牡蠣肉及其酶解產(chǎn)物的生物活性研究
    1.3 改善男性性功能活性研究
    1.4 生物活性肽的制備方法研究
        1.4.1 酶解法
        1.4.2 微生物發(fā)酵法
        1.4.3 化學合成法
    1.5 生物活性肽的分離純化方法研究
        1.5.1 膜分離技術(shù)
        1.5.2 凝膠色譜法
        1.5.3 離子交換色譜
        1.5.4 反相高效液相色譜
    1.6 本課題研究的目的意義和主要內(nèi)容
        1.6.1 本課題研究的立項背景和意義
        1.6.2 本文研究的主要內(nèi)容
2 太平洋牡蠣的物種鑒定和酶解工藝優(yōu)化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與設(shè)備
        2.2.1 原料與試劑
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 應(yīng)用16s rRNA技術(shù)對太平洋牡蠣進行物種鑒定
        2.3.2 木瓜蛋白酶酶解牡蠣單因素條件選擇
        2.3.3 正交實驗因素水平
        2.3.4 多肽含量的測定
        2.3.5 統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 基于16s rRNA技術(shù)對太平洋牡蠣進行物種鑒定結(jié)果
        2.4.2 木瓜蛋白酶酶解牡蠣單因素條件對酶解效果的影響
        2.4.3 正交試驗結(jié)果與分析
    2.5 本章小結(jié)
3 牡蠣酶解產(chǎn)物的初步分離及對小鼠睪丸間質(zhì)細胞增殖和睪酮分泌的影響..
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與設(shè)備
        3.2.1 原料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 牡蠣酶解產(chǎn)物的制備流程
        3.3.2 超濾分級
        3.3.3 蛋白質(zhì)回收率測定
        3.3.4 牡蠣酶解產(chǎn)物及其超濾組分分子量分布測定
        3.3.5 MTT法對TM3 細胞體外增殖活性評價
        3.3.6 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測睪酮含量
        3.3.7 統(tǒng)計分析
    3.4 實驗結(jié)果與討論
        3.4.1 膜超濾后的分離組分蛋白質(zhì)回收率比較
        3.4.2 牡蠣酶解產(chǎn)物及其超濾組分分子量分布
        3.4.3 牡蠣酶解產(chǎn)物及其超濾組分對TM3 細胞增殖的影響
        3.4.4 牡蠣酶解產(chǎn)物及其超濾組分對TM3 細胞睪酮分泌的影響
    3.5 本章小結(jié)
4 OP-I 組分的進一步分離及對小鼠睪丸間質(zhì)細胞增殖和睪酮分泌的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與設(shè)備
        4.2.1 原料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 OP-I 組分的制備
        4.3.2 Sephadex G-25 凝膠層析分離純化
        4.3.3 Sephadex G-15 凝膠層析分離純化
        4.3.4 凝膠層析分離純化組分分子量分布測定
        4.3.5 MTT法對TM3 細胞體外增殖活性評價
        4.3.6 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測睪酮含量
        4.3.7 統(tǒng)計分析
    4.4 實驗結(jié)果與討論
        4.4.1 Sephadex G-25 凝膠層析分離純化
        4.4.2 Sephadex G-25 凝膠層析分離組分的分子量分布
        4.4.3 Sephadex G-25 分離組分促進小鼠體外睪酮分泌活性評價
        4.4.4 Sephadex G-15 凝膠層析分離純化
        4.4.5 Sephadex G-15 分離組分促進小鼠體外睪酮分泌活性評價
    4.5 本章小結(jié)
5 結(jié)論與展望
    5.1 研究結(jié)論
    5.2 研究展望
參考文獻
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]兩種酶水解制備絲素肽的抗菌性及對人胚腎細胞的毒性分析[J]. 成希飛,楊沙,陳果,趙一萍,彭婭林,周游,徐立.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2019(06)
[2]生物活性肽制備工藝的研究進展[J]. 陳麗娜,溫宇旗,韓國慶,王耀新,王繼明,杜芳,逯振宇,蘇秀蘭.  農(nóng)產(chǎn)品加工. 2018(17)
[3]牡蠣低聚肽配伍核桃低聚肽和山藥多糖對雄性小鼠性功能的影響[J]. 張亭,李迪,烏蘭,杜倩,珠娜,李勇.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學. 2018(12)
[4]鱸魚（Lateolabrax japonicus）蛋白抗氧化肽的酶解制備及結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 趙翊君,鄭淋,蔡勇建,趙強忠.  現(xiàn)代食品科技. 2018(06)
[5]遼寧黃渤海沿岸長牡蠣遺傳多樣性分析[J]. 于思夢,高磊,王偉,赫崇波,鮑相渤,田梅林.  經(jīng)濟動物學報. 2017(04)
[6]小分子牡蠣多肽對雄性小鼠性功能的影響[J]. 陳悅,李路,閆朝陽,王澤松,隋維愷,楊鵬,王浩峰,李瑞雪,李云坤,練方亮,李冬,馮群力,馮志江,曾憲垠,孟鳳燕,卜貴鮮,曹曉涵,杜小剛.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2019(01)
[7]馬氏珠母貝免疫活性肽的純化與鑒定[J]. 鄧志程,張迪,吉宏武,曹文紅,蘇偉明.  廣東海洋大學學報. 2017(04)
[8]我國貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)的現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J]. 闕華勇,張國范.  海洋科學集刊. 2016(00)
[9]南極磷蝦肽制備工藝優(yōu)化及體外抗氧化研究[J]. 張元元,汪之和,陳敏,施文正.  上海海洋大學學報. 2016(05)
[10]河蜆肉抗氧化肽的分離及活性研究[J]. 劉晶晶,湯會芳,郭芝琳,韓曜平,王雪鋒,戴陽軍.  食品工業(yè)科技. 2016(04)

碩士論文
[1]近江牡蠣多肽的分離純化及其抗氧化、抗光老化活性研究[D]. 葉昱輝.華南理工大學 2018
[2]牡蠣免疫活性成分的分離純化及產(chǎn)品開發(fā)[D]. 李婉.廣東海洋大學 2017
[3]牡蠣ACE抑制肽的分離鑒定及性質(zhì)研究[D]. 周麗杰.大連海洋大學 2017
[4]牡蠣蛋白酶解產(chǎn)物抗疲勞作用研究及新產(chǎn)品研發(fā)[D]. 常格.廣東海洋大學 2016
[5]遠東擬沙丁魚ACE抑制肽的研究[D]. 王晶晶.廣東海洋大學 2016
[6]桉樹煙液液熏尼羅羅非魚、太平洋牡蠣產(chǎn)品的研究[D]. 包宇婷.廣東海洋大學 2015
[7]牡蠣活性肽降血糖和抑制ACE作用研究[D]. 張輝.廣西醫(yī)科大學 2009



本文編號：3052552