葡甘露聚糖(Glucomannans,GMs)來源于天然的植物,在調(diào)節(jié)宿主腸道免疫,保護腸道黏膜,改善腸道菌群等方面具有多種生物活性。本論文從魔芋、蘆薈、鐵皮石斛中獲得了三種GMs:魔芋葡甘露聚糖、蘆薈葡甘露聚糖和鐵皮石斛葡甘露聚糖,采用葡聚糖硫酸鈉(Dextran sodium sulfate,DSS)構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型,對結(jié)腸炎模型小鼠給予三種GMs,通過考察它們對模型小鼠腸道黏膜損傷、腸道黏膜免疫以及腸道菌群的影響,比較三種GMs抗炎作用的差異。此外,本論文還在細胞水平上考察了三種不同來源GMs對腸上皮細胞IEC-6增殖以及對DSS致?lián)p細胞存活率的影響。本論文主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1、考察了三種GMs對炎癥小鼠腸道黏膜損傷的保護作用。采用DSS構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型,對結(jié)腸炎小鼠灌胃GMs,研究GMs對小鼠腸道黏膜損傷的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):三種GMs均能改善結(jié)腸炎小鼠的健康狀態(tài),恢復(fù)結(jié)腸炎小鼠的體重;能夠改善腸道結(jié)構(gòu),促進杯狀細胞的增長,促進黏蛋白的分泌,修復(fù)腸黏膜的完整性,增加了腸上皮的屏障防御功能。表明GMs能夠減緩結(jié)腸炎小鼠腸道黏膜的損傷情況。2、探討了三種GMs對炎癥小鼠腸道黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用。采用DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型伴隨著腸道黏膜免疫失調(diào),對模型小鼠同時給予三種GMs灌胃,考察其對結(jié)腸炎小鼠腸道黏膜免疫功能的影響。采用RT-qPCR測定各組小鼠結(jié)腸組織中相關(guān)Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)mRNA的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn):三種GMs均能夠顯著提高結(jié)腸炎小鼠的胸腺指數(shù);平衡抗炎細胞因子和促炎細胞因子的分泌水平,促進結(jié)腸炎小鼠抗炎因子的分泌并降低促炎因子水平;能夠顯著提高結(jié)腸炎小鼠相關(guān)免疫細胞的數(shù)量;調(diào)節(jié)組織中TLRs mRNA的表達。表明GMs具有調(diào)節(jié)腸炎小鼠腸道黏膜免疫的作用。此外,GMs調(diào)節(jié)腸道黏膜免疫功能的通路可能是通過激活TLRs,從而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。3、分析了三種GMs對炎癥小鼠腸道菌群和SCFAs的改善作用。采用DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型伴隨著腸道菌群失調(diào),對模型小鼠灌胃三種GMs,之后收集小鼠糞便,測定其對短鏈脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)濃度的影響;采用基因測序的方法檢測小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu),探討GMs對結(jié)腸炎小鼠糞便中菌群組成的影響。結(jié)果表明:三種GMs能夠增加結(jié)腸炎小鼠糞便中SCFAs的濃度;此外,還可上調(diào)結(jié)腸炎小鼠腸道中梭菌目下未命名的菌屬、顫螺旋菌屬、瘤胃球菌屬和胃螺桿菌樣細菌的菌群豐度,下調(diào)擬桿菌屬、S24-7菌科下未命名的菌屬、薩特氏菌屬和腸桿菌科下未命名的菌屬的菌群豐度。表明GMs能夠改善腸道的代謝環(huán)境和改善腸道菌群的失調(diào)。4、探究了三種GMs對腸上皮細胞IEC-6增殖的影響及對DSS致?lián)p細胞的保護作用。將DSS作用于IEC-6細胞,構(gòu)建腸道細胞損傷模型,并進行細胞毒性測試。對DSS致?lián)p細胞模型給予三種GMs,測定細胞的存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),三種GMs在一定濃度范圍內(nèi)對細胞沒有毒性;DSS能夠成功構(gòu)建IEC-6損傷模型,三種GMs能夠提高DSS致?lián)p細胞的存活率。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.4
【部分圖文】：

第 1 章 緒論腸道內(nèi)主要的發(fā)酵產(chǎn)物和腸道菌群與宿主腸上皮細胞的主要能量來源，主類包括乙酸、丙酸、戊酸、丁酸[30]。不同種類的 SCFAs 在各個環(huán)境下發(fā)揮著不同的作用，主要功能包括保護腸道屏障的完整性、氧化功能、維持水電解質(zhì)的平衡、為結(jié)腸細胞提供能量節(jié)腸道免疫、抗炎、抗腫瘤等[31,32]。乙酸參與人體固醇類物質(zhì)的合成，是合固醇的重要物質(zhì)，機體能夠從中得到能量。丙酸參與肝臟代謝，是肝臟代能源物質(zhì)，能夠降低肝膽固醇水平[33]。丁酸是 IECs 能量的重要來源，能夠促炎細胞因子表達的信號傳遞通路，從而減緩腸道的炎癥反應(yīng)。如果產(chǎn)丁微生物減少，機體內(nèi)的丁酸也減少，則會引起腸道平衡的失調(diào)和腸道穩(wěn)定的破壞，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生[34]。

雌性 BALB/c 小鼠 80 只，體重 20.0±2.0 g，6-8 周齡。飼養(yǎng)條件：房間溫2±2℃，相對濕度 55±10%，12 h/12 h 的燈光/黑暗循環(huán)，實驗前靜養(yǎng) 7 天。采SS 構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型：給小鼠服用含有 DSS 的飲用水，給予 3%的 DSS 5 天，之后給予 5%的 DSS 飲用 6 天進行造模。將小鼠隨機分為 8 組（n=10），實驗分組如圖 2-1 所示，包括：正常組（為 C 組）：全程給予正常飲用水，并同時灌胃生理鹽水 18 天。魔芋葡甘露組（標記為 K 組）、蘆薈葡甘露聚糖組（標記為 A 組）、鐵皮石斛葡甘露聚（標記為 D 組）：全程給予正常飲用水，同時分別對小鼠灌胃 200 mg/kg B魔芋葡甘露聚糖、蘆薈葡甘露聚糖、鐵皮石斛葡甘露聚糖 18 天。結(jié)腸炎模（標記為 M 組）：給予含 DSS 的飲用水 11 天，同時灌胃生理鹽水 18 天。炎+魔芋葡甘露聚糖組（標記為 KM 組）、結(jié)腸炎+蘆薈葡甘露聚糖組（標記M 組）、結(jié)腸炎+鐵皮石斛葡甘露聚糖組（標記為 DM 組）：給予含 DSS 的飲 11 天，分別對小鼠灌胃 200 mg/kg BW 的魔芋葡甘露聚糖、蘆薈葡甘露聚糖皮石斛葡甘露聚糖 18 天。

圖 2-2 三種葡甘露聚糖對小鼠體重變化的影響。*p < 0.05，**p < 0.01，與模型組相比的顯著性差異；#p < 0.05，##p < 0.01，與正常組相比的顯著性差異。Figure 2-2 The effects of the GMs on body weight of mice.*p < 0.05,**p < 0.01 compared withgroup M;#p < 0.05,##p < 0.01 compared with group C.2.4.2 飼養(yǎng)效率如表 2-5 所示，給予正常小鼠三種葡甘露聚糖灌胃后，小鼠的飼養(yǎng)效率（K＜A＜D）與正常組相比顯著降低（p＜0.05）。DSS 造模后，與正常對照組相比，結(jié)腸炎組小鼠的飼養(yǎng)效率顯著降低（p＜0.01）。給予結(jié)腸炎小鼠葡甘露聚糖灌胃后，KM、AM、DM 組小鼠的飼養(yǎng)效率比模型組顯著提高（p＜0.01）。其中 DM組增加效果最明顯，更接近正常組。2.4.3 疾病活動指數(shù)（DAI）DAI 是一項與炎癥性腸病相關(guān)的重要判斷指標。如表 2-5 所示，正常對照組
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本文編號：2849574