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芹菜苷在體胃、腸吸收代謝機(jī)制及代謝物抗氧化能力研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-20 13:22
   芹菜是一種兩年生的傘形花科草本植物,具有多種生物活性,如降血壓、降血脂、抗氧化等多種作用。芹菜黃酮的研究多集中于生物活性方面,芹菜黃酮在體內(nèi)消化吸收方面的研究較少。本文以芹菜苷為研究對(duì)象,利用大鼠胃、腸灌流模型研究芹菜苷在體吸收機(jī)制;诜前袠(biāo)代謝組學(xué)技術(shù),采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC/MS)研究芹菜苷在體內(nèi)代謝變化。通過(guò)人臍靜脈細(xì)胞(HUVECs)氧化損傷模型,考察芹菜苷代謝物對(duì)HUVECs的活性因子的變化,評(píng)價(jià)抗氧化能力。為芹菜的合理膳食、在體內(nèi)吸收代謝作用及其代謝物功能活性的研究等提供理論依據(jù)。(1)建立大鼠胃、腸灌流模型,研究芹菜苷在體胃、腸消化吸收特征,加入蛋白抑制劑考察對(duì)芹菜苷吸收速率常數(shù)(Ka)、表觀滲透系數(shù)(Papp)和累積吸收量的影響,探究芹菜苷在體腸吸收機(jī)制。結(jié)果表明芹菜苷在胃中吸收百分率在4-15%之間,芹菜苷在胃中的吸收性較差。芹菜苷在小腸中通過(guò)被動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞竭M(jìn)行吸收轉(zhuǎn)運(yùn);30、90、150 μg/mL的芹菜苷在胃中消化吸收2 h后,其累積吸收量分別0.173、0.181、0.189 mg。腸道中消化吸收2 h后,其累積吸收量分別為0.998、1.089、1.509 mg。在小腸部位,各腸段吸收大小為:十二指腸空腸回腸結(jié)腸。說(shuō)明十二指腸是芹菜苷在小腸吸收的最佳部位。芹菜苷是P-糖蛋白(P-gp)、寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PEPT)的底物,P-糖蛋白(P-gp)外排作用與寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(PEPT)攝取作用是芹菜苷小腸吸收的主要吸收機(jī)制。(2)采用非靶標(biāo)代謝組學(xué)技術(shù)研究芹菜苷在胃、腸消化吸收過(guò)程中的代謝變化。結(jié)果顯示,在正模式下得出具有差異性的代謝產(chǎn)物總共22種,其中酚類化合物5種;負(fù)模式下得出具有差異性的代謝產(chǎn)物總共39種物質(zhì),其中酚類化合物14種。差異性物質(zhì)種類主要包括黃酮類、脂肪酸類、氨基酸類、糖類、有機(jī)酸類等。芹菜苷吸收代謝過(guò)程中主要影響的通路有氨基酸代謝、脂肪酸代謝、糖代謝和有機(jī)酸代謝等。(3)通過(guò)人臍靜脈細(xì)胞(HUVECs)氧化損傷模型,考察芹菜苷代謝物的抗氧化能力,結(jié)果表明,與模型損傷組相比,(30、90、150 ug/mL)的芹菜苷胃消化組的NO含量分別提高了 45.88%、67.76%、54.58%;芹菜苷腸消化組NO含量分別提高了 19.52%、55.29%、28.23%;芹菜苷胃消化組的MDA含量分別提高了 43.25%、49.06%、55.90%。芹菜苷腸消化組MDA含量分別提高了 33.77%、41.25%、48.25%。芹菜苷胃、腸代謝物能顯著降低細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度,有效抑制細(xì)胞內(nèi)氧化自由基的產(chǎn)生,具有明顯的抗氧化能力,且抗氧化能力與濃度呈正相關(guān)性。
【學(xué)位單位】:揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:TS255.1
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 芹菜簡(jiǎn)介
        1.1.1 芹菜
        1.1.2 芹菜黃酮類物質(zhì)
    1.2 消化吸收模型的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 消化吸收模型
        1.2.2 胃、腸灌流模型研究現(xiàn)狀
    1.3 氧化應(yīng)激模型
        1.3.1 內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激模型
        1.3.2 人臍靜脈細(xì)胞(HUVECs)氧化損傷模型的研究現(xiàn)狀
    1.4 代謝組學(xué)
        1.4.1 代謝組學(xué)概述
        1.4.2 代謝組學(xué)的研究方法與分析技術(shù)
        1.4.3 代謝組學(xué)的研究現(xiàn)狀
    1.5 研究的內(nèi)容與意義
        1.5.1 研究目的與意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 芹菜苷在體胃-腸消化吸收機(jī)制
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 胃、腸灌流液中芹菜苷的方法學(xué)考察
        2.2.2 大鼠胃灌流模型的建立
        2.2.3 大鼠腸灌流模型的建立
        2.2.4 蛋白抑制劑對(duì)芹菜苷吸收的影響
        2.2.5 吸收特征指標(biāo)測(cè)定與計(jì)算
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 芹菜苷胃、腸灌流液專屬性考察
        2.4.2 芹菜苷胃、腸灌流液穩(wěn)定性考察
        2.4.3 芹菜苷胃、腸灌流液回收率考察
        2.4.4 大鼠胃、腸壁對(duì)芹菜苷的物理吸附性的考察
        2.4.5 芹菜苷在體胃消化吸收特征
        2.4.6 芹菜苷在體腸消化吸收特征
        2.4.7 芹菜苷含量與吸收量變化之間的相關(guān)性
        2.4.8 蛋白抑制劑對(duì)芹菜苷體腸吸收的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 芹菜苷在體代謝機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣本預(yù)處理
        3.2.2 LC/MS分析
    3.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 芹菜苷代謝物離子色譜圖分析
        3.4.2 差異性代謝物分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 芹菜苷代謝物抗氧化能力研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 樣品預(yù)處理
        4.2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性
        4.2.3 芹菜苷代謝物抗氧化能力
        4.2.4 流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡
    4.3 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 細(xì)胞活性
        4.4.2 芹菜苷代謝物抗氧化應(yīng)激能力
    4.5 本章小結(jié)
主要結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文

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