皮蛋,又名松花蛋,是由中國首創(chuàng)的傳統(tǒng)風味蛋制品,以其清香可口,方便食用等特點受到廣大消費者的喜愛。除了皮蛋絕佳的食用性,皮蛋固有的禽蛋特質(zhì)和其特殊的加工工藝賦予其更多營養(yǎng)價值和功效。中醫(yī)認為,皮蛋性寒涼,具有清熱降火的功效。“上火”一詞源于中醫(yī)的專業(yè)術(shù)語,現(xiàn)已廣泛的運用于人們的日常生活中,其臨床表現(xiàn)主要為一系列輕微且反復的疾病。“上火”的具體成因和機制尚不清楚,但研究表明,與上火相關(guān)的生物學指標有很多,其中氧化應激以及炎癥與其具有重要的關(guān)聯(lián)。目前,對于皮蛋營養(yǎng)價值和功效研究還較為薄弱,基于此,本文通過細胞、動物實驗對皮蛋清熱降火以及抗炎功效進行研究,以期為后續(xù)皮蛋中有效成分的探究奠定基礎,并為皮蛋相關(guān)的功能產(chǎn)品提供相應的理論依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下:(1)通過建立LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞炎癥模型,對比了皮蛋全蛋(DWPE)、蛋清(DPEW)和蛋黃(DPEY)模擬胃腸道消化產(chǎn)物的抗炎效果。結(jié)果表明,LPS刺激炎癥模型建立成功后,RAW264.7細胞活性顯著升高,DWPE對LPS誘導的細胞活性的異常增加有一定的抑制作用,可能通過調(diào)節(jié)炎癥細胞活性來發(fā)揮抗炎活性。DWPE、DPEW和DPEY對細胞中NO含量的增加有顯著的下調(diào)作用。其中DPEW和DPEY效果更為顯著。同時,各濃度的DPEW對TNF-α、IL-6含量具有最佳的下調(diào)作用。DPEW和DPEY則對COX-2和iNOS的mRNA表達均有顯著的下調(diào)作用并成劑量依賴的規(guī)律。通過對比,皮蛋蛋清(DPEW)模擬胃腸道消化產(chǎn)物的抗炎效果最佳。(2)探究了DPEW在RAW264.7細胞中發(fā)揮抗炎作用的機理。結(jié)果表明DPEW可以抑制LPS誘導的炎癥反應,抑制炎癥介質(zhì)NO和促炎癥細胞因子IL-1β的大量分泌,顯著下調(diào)TRL4和P65 mRNA的大量表達。DPEW還可以抑制由LPS誘導的IκB、ERK和JNK蛋白的磷酸化,顯著阻止P65蛋白的核轉(zhuǎn)移,從而抑制NF-κB和MAPK通路的激活,發(fā)揮抗炎的功效。(3)探究了DPEW體外抗氧化能力以及對H_2O_2誘導的RAW264.7細胞損傷的保護作用。結(jié)果表明,DPEW具有顯著的DPPH、OH·自由基清除能力,DPEW對自由基的清除能力呈現(xiàn)出劑量依賴。其中,DPEW對DPPH自由基清除效果顯著優(yōu)于0.5 mg/mL VC;DPEW對OH·自由基的清除率可達0.5 mg/mL VC的一半。同時,DPEW對三價鐵離子具有顯著的還原能力,隨著濃度的增加呈現(xiàn)出劑量依賴,還原能力可達0.5 mg/mL VC的一半。在細胞模型中,DPEW對H_2O_2誘導的RAW264.7細胞損傷具有保護作用:不同濃度的DPEW對RAW264.7細胞中SOD活性出現(xiàn)不同程度的上調(diào)作用,其中,上調(diào)SOD活性可達損傷模型組的2倍;類似的,不同濃度的DPEW處理后,RAW264.7細胞中GSH含量也出現(xiàn)了不同程度的上調(diào);NO含量出現(xiàn)不同程度的下調(diào),隨著DPEW濃度的升高,細胞中NO含量的協(xié)調(diào)呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系;與此同時,RAW264.7細胞中GSH-px mRNA表達量表現(xiàn)出不同程度的上調(diào)。由此可見,DPEW具有良好的抗氧化功效。(4)探究了皮蛋蛋清對促進口腔潰瘍大鼠恢復中發(fā)揮的作用。結(jié)果表明,皮蛋蛋清可以顯著減輕大鼠口腔潰瘍模型中局部炎癥細胞浸潤程度,黏膜結(jié)構(gòu)有所恢復,空泡減少,組織結(jié)構(gòu)重塑,緩解了口腔潰瘍局部破潰和充血水腫的情況,縮小口腔潰瘍面積,增加了PCNA表達陽性程度,促進愈合。同時,皮蛋蛋清可以對口腔潰瘍大鼠血清中的TNF-α、IL-6含量均有顯著的下調(diào)作用,對TNF-α和IL-6基因表達的上調(diào)有不同程度的抑制作用,對MDA含量及SOD活力有不同程度的調(diào)節(jié)作用,具有良好的抗炎和抗氧化作用,發(fā)揮了“清熱降火”的作用。
【學位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS253.4
【部分圖文】：

反應條件：50℃ 2 min，95℃ 10 min；95℃ 30 sec ，60℃ 30 sec，40 cycles，溶解曲線。.6 數(shù)據(jù)處理描述性統(tǒng)計和方差分析用 IBM SPSS Statistics 21 軟件進行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均值±方差（x±s）表示，P<0.05 則為統(tǒng)計學上存在顯著性差異，用 GraphPadm 軟件作圖。果與分析 細胞活性的測定205bpReverse 5‘- TCAGGGATGTGAGGAGGGTA-3’Mus INOS Forward 5‘- TTGGCTCCAGCATGTACCCT-3’121bpReverse 5‘- TCCTGCCCACTGAGTTCGTC-3’

皮蛋清熱降火和抗炎功效的研究和 DPEY 下培養(yǎng) 24 小時后，RAW264.7 細胞的活性相較于空白對照組的細胞活沒有顯著的抑制作用。證明在濃度 10-500 μg/mL 范圍內(nèi)，DWPE、DPEW 和 D對 RAW264.7 細胞沒有明顯的細胞毒性，可以運用以上濃度繼續(xù)進行下一步的實2.2 脂多糖誘導的細胞活性的測定

圖 2-2. DWPE（A）、DPEW 和 DPEY（B）對 LPS 誘導的細胞活性的影響Fig.2-2 The effect of DWPE（A）, DPEW and DPEY（B）on LPS-stimulated cell viability注：字母相同表示差異不顯著(P > 0.05)；字母不同表示差異顯著(P < 0.05)。由圖 2-2 可知，經(jīng)過 LPS 刺激后，細胞活性均有顯著的增加(P<0.05)，增加可達 50%-200%，證明細胞炎癥構(gòu)建成功，同時圖 A 中 10、50 和 100 μg/mLDW樣品對 LPS 誘導的 RAW264.7 細胞活性的異常增加有顯著的的抑制作用，可抑制胞活性異常增加的 25%-50%。2.3 一氧化氮（NO）測定
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本文編號：2845238