發(fā)布時間：2020-09-15 17:28

　　 天然高分子具有較好的生物相容性與生物可降解性,可以作為生物活性物質(zhì)的載體材料而被廣泛研究。在食品中,蛋白與多糖是最為常見的天然高分子,兩者之間很容易發(fā)生相互作用,從而影響蛋白的結(jié)構并改變其功能性質(zhì),這可作為修飾蛋白結(jié)構的一種有效方法。表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG能夠捕獲活性氧,在我們的飲食中常被稱為強天然抗氧化劑,它還具有抗菌、抗腫瘤、保護神經(jīng)系統(tǒng)等功效。在體外它容易受pH、溫度、光照、金屬離子等因素影響;在體內(nèi),它的低脂溶性導致難以被細胞吸收,又容易受胃腸液pH、酶等的影響,因而生物利用率較低,限制了 EGCG在實際生活中的應用。本文旨在利用β-乳球蛋白(β-Lg)與阿拉伯膠(GA)構建一種新的蛋白-多糖納米體系。研究表明通過β-乳球蛋白分子上帶正電荷的氨基酸殘基與阿拉伯膠多糖側(cè)鏈上帶負電的酯基之間的靜電吸引作用,可形成β-Lg-GA復合物。利用此復合體系包載EGCG,以期提高其穩(wěn)定性及生物利用率。構建了β-乳球蛋白(β-Lg)與阿拉伯膠(GA)的復合體系,并對其性質(zhì)進行了測定。由濁度實驗可知,pH在1.2-7的范圍內(nèi)時,隨著pH值的降低出現(xiàn)四個區(qū)域(共溶區(qū)、可溶性復合物區(qū)、不可溶性復合物區(qū)、共溶區(qū))。β-乳球蛋白與阿拉伯膠純?nèi)芤旱臐岫入SpH值的降低只有輕微的變化。當β-乳球蛋白/阿拉伯膠(GA)的比例由1:3至1:1逐漸變化時(β-乳球蛋白含量增加,阿拉伯膠含量減少),濁度值增加,說明提高蛋白含量有助于復合物的形成,最佳濁度值在比例為2:1時出現(xiàn)。溫度、NaCl濃度及鹽離子種類對濁度值影響較大,表明疏水和靜電相互作用是形成蛋白與多糖復合物的主要驅(qū)動力。Zeta電位實驗中進一步得出靜電相互作用是形成蛋白與多糖復合物的主要原因。通過動態(tài)光散射實驗測得不同pH條件下β-乳球蛋白-阿拉伯膠的粒徑分布,也再次驗證了濁度實驗中四個區(qū)域的存在。差示掃描量熱實驗(DSC)也表明形成復合物以后,其熱穩(wěn)定性也有提高,傅里葉紅外光譜實驗(FTIR)發(fā)現(xiàn)β-乳球蛋白分子上的-NH3+與GA多糖側(cè)鏈上的-COO-之間的相互作用促使復合物的形成。詳細考察了β-Lg-GA復合物在加熱前后組裝行為的變化,復合物加熱溫度在30-50℃時,濁度發(fā)生輕微的變化,當溫度在70-85℃時,濁度在pH = 3-4之間驟增,電位沒有變化,粒徑減小,復合物的變化趨勢與加熱前一致。內(nèi)源性熒光光譜與紫外光譜的分析結(jié)果與濁度一致,同時發(fā)現(xiàn)加熱后蛋白變性導致疏水基暴露,復合物形成過程中的疏水相互作用力逐漸增強。將β-乳球蛋白-阿拉伯膠復合體系用作包載EGCG的納米載體,在最佳的實驗條件下,當EGCG的含量為0.2 mg/mL時,β-Lg-GA納米顆粒對EGCG的包載率和負載率分別達到84.5%和0.83%。通過DPPH自由基清除實驗和FRAP實驗,表明β-Lg-GA復合體系對EGCG具有很好的保護作用,無論是加熱前后還是在腸液中,均能增加其穩(wěn)定性。對制備的β-Lg-GA-EGCG體系的釋放和消化特性進行評估考察,發(fā)現(xiàn)該納米體系可有效地調(diào)控EGCG在胃腸液中的釋放行為。β-Lg-GA與β-Lg-GA-EGCG在模擬胃腸液中能夠穩(wěn)定存在。β-Lg-GA-EGCG納米粒消化3 h后,在胃液中只有23%的EGCG被釋放,在腸液中只有51%的釋放率,因此β-Lg-GA-EGCG對EGCG提供了很好的保護作用,并提高了其生物利用度。
【學位單位】：浙江工商大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS202.3;O641.3
【部分圖文】：

圖１－１邋Ｐ－乳球蛋白的三維結(jié)構逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋Ｐ－ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ逡逑ＧＡ）逡逑

２．３．１濁度分析實驗逡逑２．３．１．１邋ｐＨ對濁度的影響逡逑如圖２－丨所示，在整個酸堿滴定的過程中，單獨的阿拉伯膠溶液的濁度變化逡逑很小，濁度值接近于零。單獨的蛋白質(zhì)在ｐＨ在４－５之間有一個輕微的變化，推逡逑測是由于蛋白質(zhì)的自締合造成的。但是Ｐ－Ｌｇ與ＧＡ都是屬于比較弱的生物聚電逡逑解質(zhì)，所以ｐＨ是影響參與ｐ－Ｌｇ與ＧＡ形成復合物的電荷密度的主要原因。逡逑ＧＡ逡逑ｐＨｍａｘ＾＾邐丨邐卩－Ｌｇ－ＧＡ逡逑１．0邋＿邐卜－ｐ－Ｌｇ逡逑？邐；Ｂ：邋Ｓｏｌｕｂｌｅ逡逑？邐：邋ｂｉｏｐｏｌｙ邋ｒｉｉｅｒｓ逡逑ｉ邐Ｄ：邋Ｃｏ－ｓｏｌｕｂｌｅ邋；邐？逡逑＾邋0邋５邋＿邋ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ邋丨邋？邐丨邐Ｃｏ－ｓｏｌｕｂｌｅ逡逑專邐？邐丨ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ逡逑Ｉ邋ｐＨ＜ｐ２邐：邋Ｃ：邋Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ邋？邋＇邐；逡逑Ｋ邐ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ邐ｐＨ”逡逑０，０邋－邐ｔ邋ｉｔｉ－ｉ邋ｉ邐＊邋＜逡逑１邐１邐■邐ｉ邐Ｉ邐１邐Ｉ邐■邐ｉ邐１逡逑２邐３邐４邐５邐６逡逑ｐＨ逡逑圖２－１邋ｐ－Ｌｇ、ＧＡ和ｐ－Ｌｇ－ＧＡ復合溶液在不同ｐＨ條件下的濁度，其中ｐ－Ｌｇ和ＧＡ溶液逡逑的濃度均為０．０２５％，邋Ｐ－Ｌｇ－ＧＡ復合溶液的總濃度為０．０５％，邋ｐ－Ｌｇ和ＧＡ的比例為２：ｌ（ｗ：ｗ）逡逑Ｆｉｇ．邋２－１邋Ｔｈｅ邋ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ邋ｃｕｒｖｅｓ邋ｏｆ邋Ｐ－Ｌｇ，邋ＧＡ邋ａｎｄ邋ｐ－Ｌｇ－ＧＡ邋ｍｉｘｔｕｒｅ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐＨ．邋Ｔｈｅ逡逑ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｐ－Ｌｇ邋ａｎｄ邋ＧＡ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ邋ａｒｅ邋０．０２５％邋（ｗ％）

件參數(shù)對Ｐ－乳球蛋白－阿拉伯膠復合物形成的影響，發(fā)現(xiàn)ｐＨ邋＝邋４．２時復合凝聚作逡逑用最強。逡逑圖２－２邋ｐ－Ｌｇ－ＧＡ復合溶液的濁度在酸滴定過程中的變化逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋（３－Ｌｇ－ＧＡ邋ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐＨ逡逑２．３．１．２邋ｐ－Ｌｇ／ＧＡ的比例對復合溶液油度的影響逡逑１．０－邐%煎濉保海卞義�？邋１：２辶x希埃福澹叔澹苠巍澹保海沖義

本文編號：2819255