【摘要】：食品營(yíng)養(yǎng)與安全問題關(guān)系國(guó)計(jì)民生,靈敏快捷地檢測(cè)與食品安全相關(guān)的各種物質(zhì)對(duì)于人類的健康生活至關(guān)重要。然而,傳統(tǒng)的基于大型儀器或抗體的檢測(cè)方法存在操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、成本高等問題。因此,開發(fā)出簡(jiǎn)便、快速、高效準(zhǔn)確的檢測(cè)方法對(duì)保障人們健康至關(guān)重要。本文基于近年來新型納米材料和熒光傳感技術(shù)的發(fā)展,構(gòu)建了三種以碳量子點(diǎn)(carbon quantum dots,CQDs)為熒光納米探針的熒光檢測(cè)法,用于葡萄糖和赭曲霉毒素A(OTA)的檢測(cè):(1)利用Mn O2納米片和CQDs構(gòu)建了一種新型的熒光和比色雙模式檢測(cè)法,實(shí)現(xiàn)對(duì)葡萄糖的定量檢測(cè)。由于靜電相互作用,CQDs吸附到Mn O2納米片表面,發(fā)生能量轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致CQDs熒光猝滅;當(dāng)葡萄糖被葡萄糖氧化酶(GOD)氧化時(shí),會(huì)產(chǎn)生H2O2中間產(chǎn)物,棕色的Mn O2納米片能夠被H2O2還原并分解,產(chǎn)生無色的Mn2+離子,使溶液的吸光度降低;同時(shí),CQDs游離到溶液中,使熒光信號(hào)恢復(fù)。該方法對(duì)葡萄糖的線性檢測(cè)范圍為:熒光法5~1000μM,比色法20~600μM。檢測(cè)限分別為2.11μM和2.18μM。該方法操作簡(jiǎn)便,靈敏度和選擇性較好,利用兩種信號(hào)輸出手段,使檢測(cè)手段多樣性,提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。該方法還成功用于人血清中葡萄糖的檢測(cè)。(2)構(gòu)建了一種基于雙磁分離的熒光法,用于小麥和玉米中OTA的檢測(cè)。制備了適配體功能化的磁性納米材料(Fe3O4 NPs-Aptamer)和互補(bǔ)DNA功能化的氮雜石墨烯量子點(diǎn)(NGQDs-c DNA)。由于Aptamer和c DNA之間的雜交反應(yīng),NGQDs-c DNA能夠與Fe3O4 NPs-Aptamer結(jié)合形成復(fù)合物,發(fā)生能量轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致NGQDs的熒光猝滅。當(dāng)溶液中加入OTA后,由于OTA與Aptamer間特異性相互作用,導(dǎo)致核酸堿基鏈打開,NGQDs-c DNA被釋放到溶液中,其熒光信號(hào)得到恢復(fù)。在本體系中,為了降低背景信號(hào)強(qiáng)度,提高檢測(cè)的靈敏度,我們對(duì)復(fù)合體系進(jìn)行雙磁分離,分別去除未反應(yīng)的NGQDs-c DNA和Fe3O4 NPs。該體系對(duì)OTA檢測(cè)線性范圍為10 n M~2000 n M,檢測(cè)限為0.66 n M。該方法在實(shí)際樣品檢測(cè)中,具有較好的選擇性和可行性。(3)采用適配體功能化的氮雜石墨烯量子點(diǎn)(NGQDs-Aptamer)為探針,磁性多孔碳(magnetic porous carbon,MPC)為分離載體,核酸外切酶I(Exo I)對(duì)信號(hào)進(jìn)行循環(huán)放大,實(shí)現(xiàn)OTA的靈敏檢測(cè)。由于Aptamer和MPC之間的p-p作用,NGQDs-Aptamer能夠吸附到MPC上,產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致NGQDs熒光猝滅。當(dāng)OTA存在時(shí),由于OTA與Aptamer之間強(qiáng)的親和作用,使NGQDs-Aptamer從MPC表面脫離,熒光信號(hào)恢復(fù)。由于Exo I可以分解NGQDs-Aptamer-OTA中的Aptamer,釋放出OTA,使其循環(huán)參與反應(yīng),引發(fā)更多的NGQDs熒光恢復(fù),因此進(jìn)一步增強(qiáng)熒光信號(hào)強(qiáng)度。該方法對(duì)OTA的線性檢測(cè)范圍為10 n M~5000n M,檢測(cè)限為2.28 n M,并成功用于檢測(cè)小麥和玉米中OTA的含量。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：O657.3;O629.11;TS207.5
【圖文】：

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文霉毒素 A 簡(jiǎn)介毒素主要是由曲霉菌屬和青霉菌屬產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，種類 A(OchratoxinA，OTA)的毒性最強(qiáng)、危害性最大[20]。OlNO6，分子結(jié)構(gòu)如圖 1.1 所示，微溶于水，可溶于乙醇等 可以污染許多食品和商品，在農(nóng)作物中含量較高，葡萄[22]。OTA 可以在人體或動(dòng)物身體組織中發(fā)生聚集，造成肝臟和腎臟，并具有致癌、致畸、致突變及免疫抑制的

I (Exo I) 實(shí)現(xiàn)對(duì) OTA 檢測(cè)信號(hào)循環(huán)放大，實(shí)現(xiàn)對(duì) OT法靈敏度和準(zhǔn)確度較高，穩(wěn)定性強(qiáng)，對(duì) OTA 的檢測(cè)范圍限為 0.3 fg/mL。劉雪平[32]等利用金電極和巰基、二茂建了一步法快速檢測(cè) OTA 的電化學(xué)方法，該方法的L，對(duì)玉米中 OTA 進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，回收率為 89.2法：主要是基于金納米粒子 (AuNPs) 或銀納米粒子 系數(shù)和對(duì)粒子間距離敏感的光學(xué)特性，可以將它們作 所示，Yang[33]等使用 AuNPs 作為檢測(cè)探針，特異性結(jié)單元，適配體與 AuNPs 間發(fā)生靜電相互作用，結(jié)合鹽誘導(dǎo)聚集的穩(wěn)定性，金納米粒子溶液保持紅色。當(dāng)加入適配體特異性結(jié)合，降低了對(duì) AuNPs 的保護(hù)能力，因l 時(shí)，AuNPs 聚集，溶液顏色由紅色變成藍(lán)色，且肉眼方法對(duì) OTA 的檢測(cè)范圍為 20~625 nM，檢測(cè)限為 20

熒光法用于葡萄糖和農(nóng)產(chǎn)品中赭曲霉毒素 A 的檢測(cè)建立熒光法檢測(cè) OTA，檢測(cè)限為 13 pg/mL，對(duì)紅葡萄酒中 OTA 檢測(cè)的加標(biāo)回收率為 94.1%~102.7%。如圖 1.3 所示，Liu[35]等采用花青素 3 (Cy3) 標(biāo)記的鏈霉親和素、AuNPs、適配體和生物素修飾的互補(bǔ) DNA 鏈等構(gòu)建了新型熒光檢測(cè)法，對(duì) OTA 的檢測(cè)范圍為 2.5 pg/mL~1 g/mL，檢測(cè)限為 1.4 pg/mL，該方法并成功地應(yīng)用于小麥和綠豆中 OTA 的定量檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐志;劉春華;李春麗;吳曉春;;咖啡中赭曲霉毒素A研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年08期

本文編號(hào)：2802637