【摘要】：六妹羊肚菌(Morchella sextelata M.Kuo)隸屬于子囊菌門(mén)Ascomycota、盤(pán)菌綱Discomycetes、盤(pán)菌目Pezizales、羊肚菌科Morchellaceae、羊肚菌屬M(fèi)orchella Dill.ex Pers,是一類(lèi)珍貴的食藥用真菌,營(yíng)養(yǎng)美味,具有重要的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值。多糖是羊肚菌重要的活性成分,具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用。本研究以六妹羊肚菌為材料,對(duì)其多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,明確其理化性質(zhì),并對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行檢測(cè)。為六妹羊肚菌多糖抗氧化劑及功能性食品的開(kāi)發(fā)和利用提供研究基礎(chǔ)。首先,本研究通過(guò)形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法將試驗(yàn)材料鑒定為六妹羊肚菌(M.sextelata)。其次,采用單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面分析法,對(duì)六妹羊肚菌多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明其最優(yōu)提取條件為:提取溫度89.94℃、液料比31.07:1 mL/g、提取時(shí)間162.86 min,在此條件下預(yù)測(cè)的多糖得率為23.98%,經(jīng)實(shí)際試驗(yàn)測(cè)得的得率為23.4%,與預(yù)測(cè)結(jié)果相符。由此得出響應(yīng)面優(yōu)化方法可用于六妹羊肚菌子實(shí)體多糖的提取條件的設(shè)計(jì)。再次,采用Sevage法及透析法去除羊肚菌粗多糖中的蛋白質(zhì)、色素和小分子物質(zhì),得到初步純化多糖MSP,通過(guò)DEAE FF離子交換柱和Sephacry S-400 HR葡聚糖凝膠柱層析得到純化多糖,命名為MSP2-1。采用凝膠色譜-示差-多角度激光光散射(gel permeation chromatography-refractive index-multi angle laser light scattering,GPC-RI-MALLS)、高效陰離子交換色譜(high performance anion exchange chromatography,HPAEC)、傅里葉變換紅外光譜儀(fourier transform infrared spectrometer,FTIR)和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)對(duì)MSP2-1理化性質(zhì)進(jìn)行分析。結(jié)果表明同,MSP2-1中多糖含量為75.6%、糖醛酸含量為14.5%和蛋白質(zhì)含量為7.6%。該多糖的分子量為3.178×104Da,主要由甘露糖(75.60%)、葡萄糖(8.28%)、半乳糖(2.62%)、葡萄糖醛酸(2.29%)、果糖(0.59%)、核糖(0.31%)、阿拉伯糖(0.21%)和巖藻糖(0.10%)組成。紅外光譜分析的結(jié)果進(jìn)一步證明了 MSP2-1為多糖類(lèi)物質(zhì)。甲基化分析的結(jié)果表明MSP2-1的糖苷鍵有7種,摩爾百分比最多的為1,6-Man,達(dá)30.07%,其次是1,2-Man、T-Glc、T-man、1,4-Man、1,2,6-Gal和 1,4,6-Man,其摩爾百分比分別為 19.47%、15.62%、11.38%、8.29%、8.21%和6.96%。最后,分別考察了MSP和MSP2-1對(duì)2,2-聯(lián)氮基雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2-azino bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]、1,1-苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、羥自由基和超氧陰離子自由基清除能力。研究結(jié)果表明,當(dāng)濃度達(dá)到0.4mg/mL時(shí),MSP和MSP2-1對(duì)ABTS的清除率達(dá)到99%;當(dāng)多糖濃度達(dá)到2 mg/mL時(shí),MSP和MSP2-1對(duì)DPPH的清除率達(dá)到93.9%和100%,對(duì)羥自由基的清除率分別為70.3%和70.11%。上述結(jié)果說(shuō)明,六妹羊肚菌多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S646.7;TS218
【圖文】：

圖 3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig. 3.1 The standard curve of determination of glucose content知，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系較好（R2=0.9991），得到線(xiàn)性回歸方程公式為（Ⅱ）：y=5.3973x－0.0101………………………吸光度值（490 nm）；葡萄糖含量/mg/mL。準(zhǔn)曲線(xiàn)公式，計(jì)算 MSP2 1 中多糖的含量見(jiàn)表 3 2。量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 的方法，繪制糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖 3.2 所示。

圖 3.2 糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig. 3.2 Standard curve of uronic acid羥聯(lián)苯法測(cè)定糖醛酸濃度，計(jì)算得到回歸方程為（Ⅲ），（Ⅲ）計(jì)算。y=0.3771x－0.0011...........................................................—525 nm 處吸光度值；—糖醛酸濃度/μg/mL；，半乳糖醛酸含量與吸光度呈良好線(xiàn)性關(guān)系，可計(jì)算樣品積及測(cè)得的糖醛酸含量，即可得出樣品中糖醛酸含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程式，計(jì)算 MSP2 1 中糖醛酸含量見(jiàn)表 3 2。含量測(cè)定蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制.3 的方法，繪制糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖 3.3 所示。

圖 3.2 糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig. 3.2 Standard curve of uronic acid聯(lián)苯法測(cè)定糖醛酸濃度，計(jì)算得到回歸方程為（Ⅲ），RⅢ）計(jì)算。y=0.3771x－0.0011..............................................................525 nm 處吸光度值；糖醛酸濃度/μg/mL；半乳糖醛酸含量與吸光度呈良好線(xiàn)性關(guān)系，可計(jì)算樣品中及測(cè)得的糖醛酸含量，即可得出樣品中糖醛酸含量。準(zhǔn)曲線(xiàn)方程式，計(jì)算 MSP2 1 中糖醛酸含量見(jiàn)表 3 2。測(cè)定白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制方法，繪制糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖 3.3 所示。

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本文編號(hào)：2779879