發(fā)布時間：2020-07-20 18:25

【摘要】：灘羊宰后成熟過程中肌肉中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)會發(fā)生一系列的生化變化,影響其功能特性及生理功能,最終影響肉質(zhì)。本文以屠宰后貯藏的灘羊肉為研究對象,應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析灘羊宰后0-4℃條件下貯藏0、4、8、12天蛋白質(zhì)種類、豐度變化,重點研究酶類蛋白質(zhì)。利用OmicsBean組學(xué)數(shù)據(jù)集成分析云平臺進行數(shù)據(jù)處理,以蛋白質(zhì)組學(xué)與代謝組學(xué)關(guān)聯(lián)研究代謝酶變化與代謝變化的聯(lián)動關(guān)系,確定參與代謝通路的差異代謝酶及其與差異代謝物的對應(yīng)關(guān)系,研究差異代謝酶對代謝途徑轉(zhuǎn)換的生化反應(yīng)驅(qū)動機制,主要研究結(jié)果如下:1.以冷鮮灘羊肉為研究對象,應(yīng)用同位素標記相對和絕對定量技術(shù)i TRAQTM(isobarictags for relative and absolute quantitation)和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS),檢測冷鮮貯藏期為 12天的灘羊肉的差異表達蛋白質(zhì)(分為0d/4d組、4d/8d組、8d/12d組)。實驗結(jié)果表明:第1組中篩選出1066個可信蛋白質(zhì);第2組中篩選出1106個可信蛋白質(zhì);第3組中篩選出1084個可信蛋白質(zhì)。三組中均鑒定到的可信蛋白質(zhì)有814個�；诤Y選出的可信蛋白質(zhì)篩選差異顯著蛋白質(zhì),結(jié)果為:第1組中篩選出159個差異顯著蛋白質(zhì);第2組中篩選出151個差異顯著蛋白質(zhì);第3組中篩選出154個差異顯著蛋白質(zhì)。對篩選出的差異蛋白質(zhì)進行層次聚類分析并篩選,找出34個灘羊肉宰后含量變化較大的差異蛋白質(zhì)。2.以差異表達蛋白質(zhì)為研究對象(重點分析酶類蛋白質(zhì)),基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),對篩選得到的差異蛋白質(zhì)進行定量、定性分析,確定差異蛋白質(zhì)的生物過程、細胞組分、分子功能以及所參與的代謝通路,結(jié)合本課題組成員研究所得的差異代謝物分析確定差異蛋白質(zhì)對代謝物的影響。實驗結(jié)果表明:差異蛋白質(zhì)參與的生物過程包括ATP代謝過程、核糖核苷三磷酸代謝過程等;在細胞組成中主要包括肌原纖維、收縮纖維、線粒體蛋白復(fù)合物等;在分子功能中主要包括水解酶活性、氧化還原酶活性等。這34個差異蛋白質(zhì)參與的代謝通路包括糖酵解/糖異生、氧化磷酸化、氨基酸生物合成、丙酮酸代謝、脂肪酸生物合成等,其中糖原磷酸化酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、丙酮酸激酶等12個代謝酶為各個代謝通路的關(guān)鍵酶,對風(fēng)味前體物質(zhì)形成的代謝通路的開啟、轉(zhuǎn)換、關(guān)閉有重要的影響作用。3.以代謝酶為研究對象,在前期實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,找出代謝酶與風(fēng)味物質(zhì)的前體、中間體的關(guān)聯(lián)性。實驗結(jié)果表明:冷鮮灘羊肉貯藏過程中差異蛋白質(zhì)、差異代謝物的種類隨貯藏時間的延長總體呈下降趨勢。在0d/4d時,顯著代謝通路為碳代謝、糖酵解/糖異生、氧化磷酸化、丙酮酸代謝其中糖原磷酸化酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶等表達量上調(diào);在4d/8d時,顯著代謝通路為脂肪酸生物合成、氨基酸生物合成,其中糖原磷酸化酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶等表達量下調(diào),3-磷酸甘油酸脫氫酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶等表達量上調(diào);在8d/12d時,脂肪酸合成酶、反式-2-癸烯基-[酰基-載體蛋白]異構(gòu)酶、中鏈�；�-[�；�-載體-蛋白質(zhì)]水解酶表達量下調(diào)。0-12d由于代謝酶表達量的變化,使原有代謝通路發(fā)生變化且產(chǎn)生新的代謝通路。灘羊宰后機體在關(guān)鍵代謝酶的調(diào)控下,不同時段發(fā)生著不同的生化代謝,各個代謝酶相互配合,開啟、轉(zhuǎn)換著代謝通路,使宰后機體內(nèi)的代謝物發(fā)生變化,產(chǎn)生風(fēng)味前體物質(zhì)。
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS251.53
【圖文】：

圖１蛋白定量標準曲線逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋Ｃｕｒｖｅ逡逑體積的待測樣品稀釋４０倍，檢測樣品吸光度，計算其平均ＯＤ５６２，代入回待測樣品稀釋后的濃度，稀釋后的濃度乘以４０后即為待測樣品的真實濃表１待測樣品吸光度及濃度逡逑Ｔａｂｌｅ邋１邋Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｐｌｅ邋ｔｏ邋ｂｅ邋ｍｅａｓｕｒｅｄ逡逑吸光度邐測定濃度（ｍｇ／ｍｌ）邐真實濃度（ｍｇ／ｍＣ０－Ｍ－Ｐ－１邐０．２９１邋土０．０１１邐０．３３６邐１３．４３５Ｃ０－Ｍ－Ｐ－２邐０．２８１±０．００１邐０．３２５邐１２．９９０逡逑Ｃ０－Ｍ－Ｐ－３邐０．２８６±０．０１０邐０．３３０邐１３．２１２逡逑Ｃ４－Ｍ－Ｐ－１邐０．２９０±０．００８邐０．３３５邐１３．３８７逡逑Ｃ４－Ｍ－Ｐ－２邐０．２９７±０．００８邐０．３４３邐１３．７２０逡逑Ｃ４－Ｍ－Ｐ－３邐０．２９９±０．００６邐０．３４５邐１３．８１５逡逑

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本文編號：2763786