【摘要】：瘦肉精萊克多巴胺是對(duì)人體危害極大的非法畜牧養(yǎng)殖添加劑,如果人誤食了含有萊克多巴胺的肉制品,其身體健康會(huì)受到嚴(yán)重?fù)p害,所以對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行快速現(xiàn)場檢測(cè)對(duì)從源頭把控肉制品產(chǎn)品的安全具有重要意義。因此,本文建立了萊克多巴胺的三種免疫側(cè)向?qū)游隹焖贆z測(cè)方法:(1)傳統(tǒng)型免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰埵萑饩R克多巴胺檢測(cè)方法的建立本方法是基于免疫識(shí)別原理和側(cè)向?qū)游鰧?shí)驗(yàn)原理對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行試紙檢測(cè),在金納米粒子表面標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體,T線固定萊克多巴胺抗原,C線固定羊抗鼠二抗,肉眼通過觀察T線和C線是否顯現(xiàn)定性分析萊克多巴胺的存在狀況,結(jié)合掃描線條灰度進(jìn)行萊克多巴胺定量分析。本實(shí)驗(yàn)對(duì)偶聯(lián)抗體量、偶聯(lián)時(shí)碳酸鉀添加量、封閉劑種類和金標(biāo)墊滴加體積關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,對(duì)萊克多巴胺的檢測(cè)在10 min內(nèi)完成,裸眼觀察的靈敏度為0.5 ppb,標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)線性范圍為0.05-2 ppb。本方法同樣適用于檢測(cè)動(dòng)物尿液中的萊克多巴胺含量,檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果高度一致,不受基質(zhì)效應(yīng)干擾。(2)增敏型免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰埵萑饩R克多巴胺檢測(cè)方法的建立本方法是在傳統(tǒng)免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰垯z測(cè)的基礎(chǔ)上增加一個(gè)增敏金標(biāo)墊,增敏墊上為羊抗鼠二抗與金納米粒子偶聯(lián)物,利用羊抗鼠二抗對(duì)金納米粒子的萊克多巴胺抗體二次識(shí)別作用增強(qiáng)T線顯色和變化強(qiáng)度使檢測(cè)靈敏度得到顯著提高。本實(shí)驗(yàn)對(duì)增敏抗體偶聯(lián)量、樣品墊處理液成分、封閉物和金納米粒子直徑進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,對(duì)萊克多巴胺的檢測(cè)在10 min內(nèi)完成,裸眼觀察靈敏度為0.05 ppb,相比于傳統(tǒng)方法提高了10倍。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.005-0.2 ppb。本方法同樣適用于檢測(cè)動(dòng)物尿液中的萊克多巴胺含量,檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果高度一致。(3)多壁碳納米管標(biāo)記免疫側(cè)向試紙瘦肉精萊克多巴胺檢測(cè)方法的建立本方法是基于競爭法免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰垯z測(cè)原理,用多壁碳納米管標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體建立免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰?對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行快速檢測(cè)。多壁碳納米管具有比表面積大、表面化學(xué)性質(zhì)可控等優(yōu)點(diǎn),但是由于其分散性差和體積大,在側(cè)向?qū)游鲱I(lǐng)域的應(yīng)用較為薄弱。本方法在多壁碳納米管表面標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體,T線固定萊克多巴胺抗原,C線固定羊抗鼠二抗,肉眼通過觀察T線和C線是否顯現(xiàn)定性分析萊克多巴胺的存在狀況,結(jié)合掃描線條灰度進(jìn)行萊克多巴胺定量分析。本實(shí)驗(yàn)對(duì)多壁碳納米管的前處理方法、偶聯(lián)抗體體積、封閉劑種類、重懸液中聚乙二醇濃度和重懸液體積進(jìn)行優(yōu)化,確定了最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,對(duì)萊克多巴胺的檢測(cè)在10 min內(nèi)完成,裸眼觀察的靈敏度為0.5 ppb,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性檢測(cè)范圍為0.05-2 ppb。本方法同樣適用于檢測(cè)動(dòng)物尿液中的萊克多巴胺含量,檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果一致,不受基質(zhì)干擾。所以利用多壁碳納米管進(jìn)行標(biāo)記建立的免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰垯z測(cè)的靈敏度不輸于傳統(tǒng)金納米粒子標(biāo)記,為下一步多壁碳納米管在免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰埳系纳疃葢?yīng)用奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS251.7
【圖文】：

本文應(yīng)用的是多壁碳納米管。多壁碳納米管是由多層石墨層卷成的同軸管狀碳分子，如圖1.1 所示。多壁碳納米管的徑向尺寸較小，在納米級(jí)量，最小內(nèi)徑為 0.4 nm，而長度是微米級(jí)量，最長可達(dá)數(shù)毫米。多壁碳納米管具有耐熱、耐腐蝕、導(dǎo)熱好、導(dǎo)電性好[20,21]等優(yōu)良特性，其特有的螺旋中空管狀結(jié)構(gòu)又賦予了多壁碳納米管的優(yōu)異的力學(xué)[22,23]、電學(xué)、熱學(xué)、儲(chǔ)氫[24]等性能，同時(shí)，由于其體積微小、比表面積大、表面化學(xué)性質(zhì)可控，使多壁碳納米管在納米技術(shù)領(lǐng)域和材料領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。多壁碳納米管在納米技術(shù)領(lǐng)域使用時(shí)，一般在多壁碳納米管表面修飾羧基[25]，但其在一般溶液中分散性較差，因而限制了其在生物傳感器、生物檢測(cè)等領(lǐng)域中的應(yīng)用。所以，用物理法和化學(xué)法對(duì)多壁碳納米管進(jìn)行處理迫在眉睫，使其長徑比降低，表面性質(zhì)改變，使碳納米管的溶解性和分散性得到極大改善[26]，從而具備了作為載體的良好條件，廣泛應(yīng)用于免疫檢測(cè)領(lǐng)域。圖 1.1 多壁碳納米管結(jié)構(gòu)圖Fig 1.1 Structure of MWNTs1.4 瘦肉精萊克多巴胺檢測(cè)方法研究及進(jìn)展目前萊克多巴胺的檢測(cè)方法主要是色譜技術(shù)和快速檢測(cè)法。色譜技術(shù)是基于大型儀器的傳統(tǒng)儀器分析方法，主要分為高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜/質(zhì)譜連用法（LC-MS）[27]、氣象色譜/質(zhì)譜連用法（GC-MS）、高效毛細(xì)管電泳等方法（HPCE）等。這些方法具有靈敏度高

分析化學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[47,48]。Li 等[49]開發(fā)了一種高效毛細(xì)管電泳合的快速檢測(cè)平臺(tái)，對(duì)飼料中的三種瘦肉精進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過程可成，其中萊克多巴胺的檢測(cè)限為 2 nmol/L。光分析法，即將熒光核酸染料與適配體結(jié)合作為特異性熒光探針對(duì)測(cè)。Zhu 等[50]使用特異性熒光適配體對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行檢測(cè)，通過對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定量分析，檢測(cè)限達(dá)到 50 pM，平均回收率為 95%-11色法，酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）[51]，與 HPLC 檢測(cè)法相比更為靈敏、快捷和低廉，但重復(fù)性與專 法差，因此適用于大批量樣品的快速初篩[52,53]。Han 等[54]建立了基色酶聯(lián)免疫吸附方法，來測(cè)定綿羊尿液中的萊克多巴胺，檢出限低。Wang 等[55]提出了一套基于適配體的比色法，如圖 1.2 所示，通過物（MIP）進(jìn)行富集和分離萊克多巴胺，膠體金顏色的改變指示了濃度，檢測(cè)限低至 10 ng/mL。Xiong 等[56]開發(fā)了一種基于多酚氧化酚類瘦肉精的比色法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)萊克多巴胺，異蘇普林，利托君和異性檢測(cè)和超靈敏檢測(cè)。

圖 1.3 電化學(xué)分析法檢測(cè)萊克多巴胺Figure 1.3 RAC Detection by electrochemical analytical method表面增強(qiáng)拉曼（Surface-Enhanced Raman Scattering, SERS）是用拉曼光譜法定吸附在金屬顆粒如銀金、銀或銅表面的樣品，或吸附在這些金屬的粗糙表面樣品[67,68]。表面增強(qiáng)拉曼克服了普通拉曼檢測(cè)靈敏度的問題，排除了環(huán)境干擾素，提高了檢測(cè)準(zhǔn)確性[69]。Zhai 等[70]用簡單的固液萃取和液液萃取方法從實(shí)際尿中提取萊克多巴胺，用表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)豬尿的提取結(jié)果，檢測(cè)靈敏度為 μg/mL。Yu 等[71]建立了一種用表面增強(qiáng)拉曼對(duì)萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅進(jìn)高靈敏雙重免疫檢測(cè)，和普通免疫檢測(cè)方法相比，拉曼有更廣的檢測(cè)范圍（1-00 pg/mL），檢測(cè)靈敏度為 1.0 pg/mL。側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)技術(shù)（Lateral flow assay），分為基于免疫識(shí)別和適配體為基礎(chǔ)測(cè)目標(biāo)物[72]。目前雖然有很多瘦肉精萊克多巴胺適配體的報(bào)道[73]，但由于側(cè)向析檢測(cè)的反應(yīng)環(huán)境限制和適配體的特異性識(shí)別能力仍需提高，所以對(duì)于瘦肉精克多巴胺的側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)仍以抗體包被原為基礎(chǔ)。Zhang 等[74]利用膠體金免疫向?qū)游鲈嚰垖?duì)萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅進(jìn)行雙重檢測(cè)，肉眼觀察的檢測(cè)靈敏

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2761573