【摘要】：蜂王漿是一種為人們所熟知的傳統(tǒng)保健食品,其組成成分復(fù)雜多樣,包括水分、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類等。蜂王漿有著極高的營養(yǎng)價(jià)值和豐富的生理活性,如抗氧化、抑菌、抗炎、神經(jīng)營養(yǎng)、免疫調(diào)節(jié)等。游離脂肪酸是蜂王漿的重要功能性組分,但目前關(guān)于對蜂王漿脂肪酸的抗炎功效知之甚少�；诒緦�(shí)驗(yàn)室前期在蜂王漿脂肪酸質(zhì)量控制方面的研究,本研究提取了蜂王漿脂質(zhì)并用多種分析技術(shù)測定了其主要成分;采用體外細(xì)胞模型初步比較了蜂王漿凍干粉及其脂提物的抗炎活性;并研究對比了蜂王漿中三種有代表性的脂肪酸單體成分:反式-10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)、10-羥基癸酸(10-HDAA)和癸二酸(SEA)對脂多糖(LPS)和脂磷壁酸(LTA)引起的細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及其機(jī)制;最后探索了 10-HDA對LTA誘導(dǎo)的小鼠急性肺炎的保護(hù)作用。主要研究結(jié)果如下:1.蜂王漿凍干粉和蜂王漿脂質(zhì)提取物中游離脂肪酸成分的分析利用氣相色譜技術(shù)和本實(shí)驗(yàn)室前期建立的方法對蜂王漿凍干粉中的10-HDA、10-HDAA和SEA的含量進(jìn)行測定,提取蜂王漿中的脂質(zhì)后通過液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對蜂王漿脂質(zhì)提取物進(jìn)行成分分析。結(jié)果顯示蜂王漿脂質(zhì)提取物中主要含有10-HDA,10-HDAA和SEA等中鏈脂肪酸,以及少量十六碳脂肪酸、十八碳脂肪酸等長鏈脂肪酸。2.蜂王漿與蜂王漿脂質(zhì)提取物對細(xì)菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7的影響為了初步探究蜂王漿的抗炎活性是否主要來自其脂質(zhì)成分,比較了蜂王漿與蜂王漿脂提物的抗炎活性,通過測定細(xì)胞炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的NO釋放量和用熒光定量PCR技術(shù)分析炎癥因子表達(dá)量后發(fā)現(xiàn)蜂王漿脂質(zhì)提取物具有良好的抗炎作用。3.10-HDA、10-HDAA和SEA對LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及其機(jī)制使用10-HDA、10-HDAA和SEA處理LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞,測定其對細(xì)胞炎癥因子NO,IL-6,IL-10和TNF-α生成的影響;對炎癥基因IL-10、iNOS、COX-2和TNF-α等的調(diào)控表達(dá);和對炎癥MAPK信號(hào)通路蛋白JNK、ERK和p38磷酸化的調(diào)控以及對NF-κB信號(hào)通路蛋白IκBα的調(diào)控作用。結(jié)果表明,10-HDA、10-HDAA和SEA的預(yù)處理均表現(xiàn)出抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥基因表達(dá)和炎癥因子產(chǎn)生的作用,但不同脂肪酸的調(diào)控程度有所差異;且三種脂肪酸對炎癥信號(hào)通路蛋白磷酸化均有所調(diào)控,展現(xiàn)出蜂王漿脂肪酸成分良好的抗炎潛力。4.10-HDA,10-HDAA和SEA對細(xì)菌脂磷壁酸(LTA)誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及10-HDA對小鼠急性肺炎的保護(hù)作用研究了 10-HDA、10-HDAA和SEA對LTA誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)和炎癥基因表達(dá)的影響,并探索了 10-HDA對急性肺炎模型小鼠血清中炎性細(xì)胞因子的分泌、肺部組織病理變化的影響及對MAPK信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白(ERK、p38和JNK)的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,10-HDA、10-HDAA和SEA對炎性介質(zhì)IL-6的生成有明顯的劑量依賴性抑制作用;且10-HDA和10-HDAA能夠降低IL-1β、IL-6、IL-10和COX-2等關(guān)鍵炎癥基因的表達(dá);10-HDA對炎癥信號(hào)通路蛋白ERK、p38和JNK的磷酸化也具有調(diào)控作用。此外,10-HDA(100mg/kg)可緩解小鼠肺組織病理學(xué)變化,調(diào)節(jié)血清中LTA引起的炎性細(xì)胞因子(IL-10、MCP-1和TNF-α的)釋放,從而對LTA引起的小鼠急性肺損傷起到一定程度的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS218;S896.3
【圖文】：

逑３．２蜂王漿脂質(zhì)提取物中脂肪酸的ＬＣ－ＭＳ檢測結(jié)果逡逑如圖４．２所示，對蜂王漿脂質(zhì)提取物樣品進(jìn)行了低分辨率液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用逡逑分析得到該條件下的蜂王漿脂質(zhì)提取物的總離子流色譜圖。逡逑ｘ１０邋７邋－ＥＳＩ邋ＴＩＣ邋Ｓｃａｎ邋Ｆｒａｇ＝１３５．０Ｖ邋ＣＦ＝０．０００邋ＤＦ＝０．０００邋ＳＡ１．ｄ逡逑２．５－邋１邐１逡逑。：？ｊｖ／Ｖ＾ｗｗＡ＾逡逑０邋＇邋ｔ邐ｔ邋ｔ邋ｔ邋邋邐！邋■邋Ｉ逡逑１邋２邋３邋４邋５邋６邋７邋８邋９邋１０邋１１邋１２邋１３邋１４邋１５邋１６邋１７邋１８邋１９邋２０邋２１邋２２邋２３邋２４邋２５邋２６邋２７邋２８邋２９逡逑Ｃｏｕｎｔｓ邋ｖｓ．邋Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ邋Ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑圖４．２蜂王漿脂質(zhì)提取物ＬＣ－ＭＳ總離子流色譜圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４．２邋ＬＣ－ＭＳ邋ＥＳＩ邋ＴＩＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｒｏｙａｌ邋ｊｅｌｌｙ邋ｌｉｐｉｄｓ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑接著根據(jù)脂肪酸的荷質(zhì)比信息（劉善菁等２０１５），得到了蜂王漿脂質(zhì)提取物逡逑樣品中羥基辛酸（８．２８１邋ｍｉｎ）、１０－ＨＤＡ邋（１１．９２１邋ｍｉｎ）、１０－ＨＤＡＡ邋（１２．９６６ｍｉｎ）、逡逑ＳＥＡ邋（邋１２．２５７ｍｉｎ）、２－十二碳烯二酸（１６＿１５１ｍｉｎ）、十二烷二酸（１６．８３８ｍｉｎ）的逡逑獨(dú)立色譜圖，如圖４．３所示。逡逑２９逡逑

邐蜂王漿脂肪酸的抗炎活性及其機(jī)制研宄邐逡逑ｘ５邋－ＥＳＩ邋ＥＩＣ（邋１５９．０）邋Ｓｃａｎ邋Ｆｒａｇ＝邋１３５．０Ｖ邋ＣＦ＝０．０００邋ＤＦ＝０．０００逡逑

邐浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐逡逑圖４．４為蜂王漿脂質(zhì)提取物中羥基辛酸、１０－ＨＤＡ、１０－ＨＤＡＡ、ＳＥＡ、２－十二逡逑碳烯二酸、十二烷二酸的質(zhì)譜圖信息的分析結(jié)果。逡逑ｘ１０邋３邋－ＳＩ邋Ｓｃａｎ邋（ｉｔ邋７．９９７－８．５３４邋ｍｉｎ．邋７３邋ｓｃａｎｓ）邋Ｆｒａｇ－１３５．０Ｖ邋ＣＦ－０．０００邋ＤＦ－０．０００邐ｘ１０？邋－ＳＩ邋Ｓｃａｎ邋（ｆｔ邋ＩＶＳＩ－ｉ－ｌ２．７７９邋ｍ？ｎ．邋１１７邋ｓｃａｎｓ）邋Ｆｒａｇ？１３５．０Ｖ邋ＣＦ－０．０００邋ＯＦ－Ｏ．ＯＯＯ逡逑

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