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不同產(chǎn)地青稞天然維生素E分離、氧化活性及品種親緣關系的研究

發(fā)布時間:2020-06-26 13:21
【摘要】:青稞屬于禾本科大麥屬作物,一直以來作為糧食、食品原料、釀造原料、飼料廣泛應用于高原地區(qū),并且在全世界范圍內,大麥其他變種也有廣泛的栽培和應用。目前,青稞主要分布在我國西藏、青海、云南、四川、貴州等地,是高原地區(qū)特色的營養(yǎng)食品,而不同產(chǎn)地不同粒色也有不同的營養(yǎng)品質。由于青稞主要作為全谷物食品,在精深加工利用方面研究較少,本研究主要利用不同提取方法對不同產(chǎn)地青稞中的維生素E含量和主要功能進行研究,并通過熒光標記微衛(wèi)星技術對不同產(chǎn)地青稞親緣關系進行比較研究,為將來進行的進一步研究提供參考。主要研究結果概括為以下幾個方面:1、試驗采用正向Venusil XBP Silica柱,優(yōu)化了維生素E高效液相色譜測定方法,得到最佳條件為測定波長265nm,流速1.0mL/min,正己烷:異丙醇=95:5(v/v),柱溫30℃,進樣量10μL。同時通過單因素實驗,以KOH添加量、皂化時間、皂化溫度、抗氧化劑添加量為指標,并在單因素基礎上,采用Box-Benhnken響應面優(yōu)化實驗因素水平,分析得到皂化法提取青稞維生素E的最佳條件為,KOH添加量1.98ml,皂化時間34.15min,皂化溫度87.3℃,抗氧化劑添加量5.25ml,在此條件下可得到維生素E最大提取含量370.236μg/g。采用超聲法對不同產(chǎn)地青稞進行提取,通過單因素實驗,以液固比、超聲時間、超聲溫度為考察因素,研究了各因素對不同產(chǎn)地青稞維生素E提取含量的影響。同時采用Box-Benhnken響應面優(yōu)化實驗因素水平,綜合分析得到超聲提取的最佳工藝條件為:液固比17.27:1,超聲溫度59.33℃,超聲時間56.24min,在此條件下得到最大維生素E提取含量為1982.74μg/g。采用亞臨界萃取法對不同產(chǎn)地青稞進行提取,通過單因素實驗,考察了萃取溫度、液料比、萃取時間三個因素對亞臨界萃取不同產(chǎn)地青稞維生素E的影響,通過Box-Benhnken響應面實驗設計對亞臨界萃取進行工藝優(yōu)化,綜合分析實驗結果得到亞臨界萃取的最佳工藝條件為:萃取溫度62.33℃,液料比25.92:1,萃取時間67.19min,在此條件下得到總維生素E提取含量為2213.72μg/g。驗證比較不同提取方式,皂化法提取青稞維生素E的實際值與理論值相比誤差范圍在2%以內;超聲提取法和亞臨界萃取法得到的青稞維生素E實際值與理論值相比誤差范圍在1%以內。同時對比不同產(chǎn)地青稞維生素E提取含量,超聲提取法得到的維生素E提取量是皂化法的5倍。2、采用TBARS法探究不同青稞維生素E提取物添加量對脂質過氧化抑制率的影響,結果表明,脂質過氧化抑制率隨著添加青稞維生素E提取物質量濃度的增加而增加,當質量濃度為350μg/mL時,各產(chǎn)地的抑制曲線都達到頂點,并且云南青稞四川青稞青海青稞西藏青稞。采用POV值測定法探究不同青稞維生素E提取物對棕櫚油的抗氧化活性,結果表明,云南青稞維生素E提取物相較于其他三個產(chǎn)地活性更高,尤其是在第6-8天期間,POV值分別為32.95-0.15meq/kg和39.91-0.21meq/kg,相較于其他三個產(chǎn)地顯著更低。實驗得到對棕櫚油抗氧化活性最適宜青稞維生素E提取物添加量為實驗時最大值36μg/g。3、對隨機分布于青稞7條染色體上的21對微衛(wèi)星引物進行熒光標記,然后對前文研究采用的4個農(nóng)家品種和已鑒定的9個青稞品種進行親緣關系比較分析并繪制得到了11個不用品種青稞的指紋圖譜。結果表明有17對引物檢測到了多態(tài)性位點,占所篩選引物的80.95%,17對引物一共檢測到了82個等位基因,平均每個位點4.82個,片段長度在143-388bp之間。其中位于染色體7H上的Bmag206引物檢測到的等位基因最多,有13個。Shannon’s指數(shù)在0.5481-2.3593之間,多態(tài)信息含量變化范圍在0.2389-0.8702之間,17個標記當中有9個高度多態(tài)性位點,占標記總量的52.94%,對不同產(chǎn)地青稞進行聚類分析結果顯示,遺傳相似系數(shù)在0.6206-0.9706之間,在遺傳相似系數(shù)為0.6206時,材料被分成了2大類,產(chǎn)地為云南昆明的農(nóng)家種Y1單獨被分成了一類,其余材料歸為另一類。17對微衛(wèi)星標記引物能很好的將11個不同產(chǎn)地青稞品種分別開來,且不同來源的品種親緣關系遠近不一,來源于不同產(chǎn)地的青稞品種也可能具有更近的親緣關系。
【學位授予單位】:西華大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:TS210.1
【圖文】:

密度分布圖,青稞,種質資源,密度分布圖


其中土耳其的產(chǎn)量為 475 萬噸[8]。大麥的種植面積近年來趨于穩(wěn)定,但我國的大麥自給率趨于 50%,每年從其他國家的進口量約 200 萬噸,其中 90%以上來自澳大利亞、加拿大和法國[9]。我國現(xiàn)種植的青稞變種主要有兩種,一種是青稞(又稱裸麥),在我國西北、西南各省常栽培,適宜高原清涼氣候,模式標本采自亞洲;另一種是藏青稞(又稱三又大麥),我國青海、西藏、四川、甘肅等省區(qū)常栽培,華北等地區(qū)也有種植,其種子來源于法國,模式標本則采于德國[10]。事實上,青稞在我國各地都有分布,自 1978 年以來,青稞的主要栽培地區(qū)還是集中在海拔較高的西藏、青海、四川等地,單產(chǎn)呈增長態(tài)勢,基本在每公頃 5-5.3 噸之間;產(chǎn)量總體上看也平穩(wěn)增長,2010 年青稞總產(chǎn)量為 60 萬噸[11]。根據(jù)大麥主產(chǎn)區(qū)的數(shù)據(jù),2002-2012 年間,江蘇省、安徽省、甘肅省、云南省、內蒙古自治區(qū)、湖北省、浙江省、四川省、河南省、新疆維吾爾自治區(qū)和黑龍江省這 11 個主產(chǎn)區(qū)的大麥播種面積占全國 95%以上[12]。

色譜圖,標準品,維生素E,色譜圖


圖 2.1 不同波長條件的維生素 E 標準品色譜圖Fig.2.1 Chromatogram of vitamin E standard at different wavelengths由不同試驗條件得到的圖譜分析,在流速為 1.0mL/min,正己烷:異丙醇=95:5(v/v的條件下,標準品的保留時間為 2.711±0.003min,誤差范圍<1%。并且在同樣條件下,波長最大的標準品峰對稱性不佳,在 265nm 波長下所得圖譜色譜峰對稱性更好,沒有雜峰,可以作為測定青稞生育酚的最佳條件。并且在此條件下以維生素 E 標準品濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,得到生育酚標準品曲線 y = 20322x - 39505,R2= 0.9992,線性良好。2.1.2.2 精密度實驗與加標回收率實驗向已知維生素 E 含量的樣品中添加相同含量的標準品溶液,按照 1.4.3 中方式處理青稞樣品(n=6),分別進樣,然后根據(jù)測得樣品中維生素 E 的質量濃度來分別計算相應的精密度和加標回收率,結果見表 2.2 和表 2.3,精密度為 1.72%,加標回收率在97.10%-102.20%之間,說明實驗條件具有良好的重現(xiàn)性。表 2.2 精密度實驗結果

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