發(fā)布時(shí)間：2020-06-22 06:11

【摘要】：隨著海洋水產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展,我國(guó)海水產(chǎn)品產(chǎn)量逐年增長(zhǎng),但隨之而來的大量副產(chǎn)物浪費(fèi)現(xiàn)象也不容忽視。磷脂廣泛存在于生物體內(nèi),海洋生物磷脂因常會(huì)連接ω-3多不飽和脂肪酸鏈而兼具磷脂和ω-3多不飽和脂肪酸的生理功能。因此,對(duì)海洋生物磷脂加以利用、分析,可以提高海產(chǎn)利用率,為海洋源食品的研究和探索提供理論支持。本文主要圍繞以下兩部分內(nèi)容展開工作:首先,以蝦頭、魷魚內(nèi)臟和金槍魚內(nèi)臟3種海洋源副產(chǎn)物為原料,利用食品加工助劑1,2-二氯乙烷代替氯仿,改良傳統(tǒng)Folch法,建立了更適合食品工業(yè)的1,2-二氯乙烷-甲醇法,并從相對(duì)磷脂提取量和磷脂組成成分兩方面將其與BlighDyer法、Folch法、MTBE法、乙醇浸提法等傳統(tǒng)方法進(jìn)行對(duì)比。4種傳統(tǒng)方法中,MTBE法對(duì)蝦頭、魷魚內(nèi)臟和金槍魚內(nèi)臟的相對(duì)磷脂提取量均最高,不同溶劑配比的1,2-二氯乙烷-甲醇法中,1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法對(duì)3種樣品的相對(duì)磷脂提取量均最高,對(duì)比上述兩種較好的方法,蝦頭的相對(duì)磷脂提取量以1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法為最佳,其余2種樣品則以MTBE法為最佳。同時(shí),1,2-二氯乙烷法和乙醇浸提法對(duì)上述樣品的相對(duì)磷脂提取量均不佳,其中乙醇浸提法為最低。除2種相對(duì)提取量較低的方法外,利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)討論其余方法對(duì)3種樣品磷脂組成成分的影響,6種方法提取的同種副產(chǎn)物的磷脂種類基本一致,蝦頭中共檢出48種磷脂,魷魚內(nèi)臟中共檢出47種磷脂,金槍魚內(nèi)臟中共檢出53種磷脂。各磷脂亞類中,不同方法對(duì)同種海洋源副產(chǎn)物中的含不飽和脂肪酸鏈磷脂和含ω-3多不飽和脂肪酸鏈磷脂的提取也幾無差別;通過計(jì)算,各方法提取所得的磷脂中,含ω-3多不飽和脂肪酸鏈磷脂的含量均較高,說明上述6種方法除可有效提取海洋源副產(chǎn)物中的磷脂外,更可有效提取其中含ω-3多不飽和脂肪酸鏈的磷脂。綜合相對(duì)磷脂提取量和對(duì)磷脂組成成分的影響分析,傳統(tǒng)提取方法中以MTBE法最佳,以1,2-二氯乙烷為萃取劑的改良Folch法中以1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法最佳。對(duì)于1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法和MTBE法,二者在提取不同種類樣品磷脂的優(yōu)劣對(duì)比上略有不同,但均為有效的磷脂提取方法,MTBE法對(duì)于樣品種類的適應(yīng)性更廣,而1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法則更加安全,更適用于食品加工行業(yè)。隨后,本文基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法和iKnife智能手術(shù)刀質(zhì)譜法3種新型脂質(zhì)組學(xué)技術(shù),分別建立了針對(duì)海洋源副產(chǎn)物磷脂的檢測(cè)及分析方法,并簡(jiǎn)要分析了各方法的優(yōu)劣性及適用范圍。以魷魚內(nèi)臟磷脂為樣品驗(yàn)證液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法,樣品經(jīng)負(fù)離子全掃描實(shí)現(xiàn)分離鑒定和定量分析,共檢出17種磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine,PC)、10種磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine,PE)、9種磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI)、11 種磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS),磷脂C原子總數(shù)為32～40,總雙鍵數(shù)為0～7,并檢測(cè)到多種含ω-3多不飽和脂肪酸鏈的磷脂。以水產(chǎn)副產(chǎn)物磷脂為樣品驗(yàn)證多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法,樣品采用流動(dòng)注射直接進(jìn)樣,經(jīng)三重四級(jí)桿質(zhì)譜母離子掃描和中性質(zhì)量丟失掃描對(duì)磷脂分子實(shí)現(xiàn)源內(nèi)分離鑒定和定量分析,共檢測(cè)出20種PC,21種PE,14種PI,14種PS,其中,磷脂C原子總數(shù)為16～22(溶血性磷脂)和32～44,雙鍵數(shù)為0～6,同時(shí)檢出多種含有二十碳五烯酸鏈(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸鏈(Docosahexaenoic acid,DHA)的磷脂。以金槍魚內(nèi)臟磷脂為樣品驗(yàn)證iKnife智能手術(shù)刀質(zhì)譜法,在m/z 600～1000處得到清晰的磷脂質(zhì)譜圖,通過二級(jí)質(zhì)譜鑒定,該方法共檢出磷脂41種,質(zhì)量范圍為m/z 699.5～911.6,檢出磷脂亞類最多的是PI,共有13種。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,上述3種脂質(zhì)組學(xué)方法均有良好的精密度,結(jié)果可重復(fù)。通過對(duì)比,3種方法各有特點(diǎn),因此適用范圍略有差別:液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法適用于樣品量較多、對(duì)檢測(cè)速度要求不高、追求分析結(jié)果精確性時(shí)的脂質(zhì)定性、定量分析;多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法適用于樣品量較少或?qū)z測(cè)時(shí)長(zhǎng)有較高要求時(shí)的脂質(zhì)定性、定量分析,可用于建立樣品快速檢測(cè)方法;iKnife智能手術(shù)刀質(zhì)譜法適用于無需定量檢測(cè)時(shí)的脂質(zhì)輪廓分析,可對(duì)未知樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)鑒定與準(zhǔn)確度評(píng)分。本課題可以進(jìn)一步加深對(duì)海洋源副產(chǎn)物磷脂提取方面的研究,充分利用其生理生化特性、擴(kuò)大其經(jīng)濟(jì)價(jià)值,還可以減少副產(chǎn)物資源浪費(fèi)、降低環(huán)境壓力,對(duì)維護(hù)生態(tài)環(huán)境起到一定的作用。對(duì)新型脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)的建立與開發(fā),能夠使脂質(zhì)組學(xué)研究更好地應(yīng)用于食品科學(xué),為該學(xué)科的研究提供新的思路,使其向更加多元化的方向發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS254.1
【圖文】：

學(xué)；ｇ．研究特定脂質(zhì)之間以及脂質(zhì)和蛋ｆｉ質(zhì)之間相互作用的功能脂質(zhì)代謝組學(xué)；ｈ．神經(jīng)逡逑脂質(zhì)代謝組學(xué)等＾逡逑目前，以脂質(zhì)組學(xué)為主題的文拿量總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（圖１－２）。我國(guó)脂質(zhì)組學(xué)研究逡逑起步較晚，通過知網(wǎng)篇名檢索“脂質(zhì)組學(xué)”僅有論文１００余篇，且大部分脂質(zhì)組學(xué)研宄：�。鹤麇义霞性谏茖W(xué)與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，而脂質(zhì)組學(xué)在食品科學(xué)領(lǐng)域的研究則相對(duì)較少。因此，在食逡逑品科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)開展脂質(zhì)組學(xué)的研究將為現(xiàn)代食品科技發(fā)展提供一個(gè)嶄新的視角。逡逑１００－逡逑９０－邐＂逡逑８０邋－邋？逡逑７０－邐／逡逑栙６０邋－逡逑｜邐５。－邐／逡逑揭邋４０－邐／逡逑３０－逡逑ｉ0－邐嚴(yán)—逡逑■邐■＾＾＇■逡逑＼邋％，邋％邋％邋＼邋＼邋＼邋％邋％邋＼邋＼邋％％６戶％逡逑年份逡逑圖１－２邋２００４－２０１７年脂質(zhì)組學(xué)相．關(guān)文章發(fā)表擺逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｔｏｔａｌ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ邋ｏｎ邋ｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ邋ｉｎ邋２００４－２０１７逡逑１．４．３脂質(zhì)組學(xué)在食品科學(xué)領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀逡逑１．４．３．１食品生物化學(xué)逡逑在食品生物化學(xué)方面，脂質(zhì)組學(xué)的研宄多與生物化學(xué)相結(jié)合，研究食品及食品原料中逡逑脂質(zhì)的組成成分、結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、功能等。Ｃａｍｐｏｓ等［４７１在用薄層色譜法比較５個(gè)不同逡逑抗寒性的咖啡品種在低溫馴化后脂質(zhì)變化時(shí)發(fā)現(xiàn)

ｙ／ｖ）邋ｍｅｔｈｏｄ；邋Ｆ．邋１，２－ＤＣＥ－ＭｅＯＨ邋（１：１，邋ｖ／ｖ）邋ｍｅｔｈｏｄ；邋Ｇ．邋１，２－ＤＣＥ－ＭｅＯＨ邋（２：１，邋ｖ／ｖ）邋ｍｅｔｈｏｄ；邋Ｈ．邋１，２－ＤＣＥ逡逑ｍｅｔｈｏｄ．逡逑如圖２－１所示，Ａ？Ｈ邋８種不同提取方法對(duì)好頭磷脂的相對(duì)提取量分別為２１．６７９±０．８９７％、逡逑３８．５０５±１．１９６％、３９．０４７±１．１５９％、１１．７５０±０．９６６％、４０．０２７±１．４３４％、２１．９１３±１．４８８％、逡逑２１．７７１±１．４４８％、１３．１６３±０．６２３％。逡逑由圖可知，對(duì)于Ｂｌｉｇｈ邋＆邋Ｄｙｅｒ法、Ｆｏｌｃｈ法、ＭＴＢＥ法、乙醇浸提法這４種傳統(tǒng)提取逡逑方怯來說，ＭＴＢＥ法和Ｆｏｌｃｈ法在對(duì)于蝦頭磷脂提取方面有著絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)，且ＭＴＢＥ法比逡逑Ｆｏｌｃｈ法更勝一籌＞邋相對(duì)的，乙醇浸提法對(duì)蝦頭磷脂的相對(duì)提取f堅(jiān)恫蝗縉溆啵持址椒�。辶x洗送�，由诱浺醇浸提法也繗]糜詰鞍字侍崛。郟福福藎虼嗽諤崛」討幸自諏字謝烊氳鞍族義現(xiàn)�，而蛋白轴尙样不溶釉r郟福梗藎帽戀矸ㄎ薹ㄈコ�，因创T蘊(yùn)崛×坑幸歡ㄓ跋�。对辶x嫌冢�，２－二录x彝椋狀擠ê停�，２－二录x襮<法，１，２－二氯乙烷－甲醇法的相對(duì)提取量隨著萃取混逡逑合液中１，２－二氯乙烷比例的增加而下降，當(dāng)萃取混合液的比例為１，２－３氯乙q<－甲醇（１：２，逡逑ｖ／ｖ）時(shí)

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本文編號(hào)：2725310