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三種海洋源副產(chǎn)物磷脂提取與新型脂質(zhì)組學方法分析

發(fā)布時間:2020-06-22 06:11
【摘要】:隨著海洋水產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展,我國海水產(chǎn)品產(chǎn)量逐年增長,但隨之而來的大量副產(chǎn)物浪費現(xiàn)象也不容忽視。磷脂廣泛存在于生物體內(nèi),海洋生物磷脂因常會連接ω-3多不飽和脂肪酸鏈而兼具磷脂和ω-3多不飽和脂肪酸的生理功能。因此,對海洋生物磷脂加以利用、分析,可以提高海產(chǎn)利用率,為海洋源食品的研究和探索提供理論支持。本文主要圍繞以下兩部分內(nèi)容展開工作:首先,以蝦頭、魷魚內(nèi)臟和金槍魚內(nèi)臟3種海洋源副產(chǎn)物為原料,利用食品加工助劑1,2-二氯乙烷代替氯仿,改良傳統(tǒng)Folch法,建立了更適合食品工業(yè)的1,2-二氯乙烷-甲醇法,并從相對磷脂提取量和磷脂組成成分兩方面將其與BlighDyer法、Folch法、MTBE法、乙醇浸提法等傳統(tǒng)方法進行對比。4種傳統(tǒng)方法中,MTBE法對蝦頭、魷魚內(nèi)臟和金槍魚內(nèi)臟的相對磷脂提取量均最高,不同溶劑配比的1,2-二氯乙烷-甲醇法中,1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法對3種樣品的相對磷脂提取量均最高,對比上述兩種較好的方法,蝦頭的相對磷脂提取量以1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法為最佳,其余2種樣品則以MTBE法為最佳。同時,1,2-二氯乙烷法和乙醇浸提法對上述樣品的相對磷脂提取量均不佳,其中乙醇浸提法為最低。除2種相對提取量較低的方法外,利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術討論其余方法對3種樣品磷脂組成成分的影響,6種方法提取的同種副產(chǎn)物的磷脂種類基本一致,蝦頭中共檢出48種磷脂,魷魚內(nèi)臟中共檢出47種磷脂,金槍魚內(nèi)臟中共檢出53種磷脂。各磷脂亞類中,不同方法對同種海洋源副產(chǎn)物中的含不飽和脂肪酸鏈磷脂和含ω-3多不飽和脂肪酸鏈磷脂的提取也幾無差別;通過計算,各方法提取所得的磷脂中,含ω-3多不飽和脂肪酸鏈磷脂的含量均較高,說明上述6種方法除可有效提取海洋源副產(chǎn)物中的磷脂外,更可有效提取其中含ω-3多不飽和脂肪酸鏈的磷脂。綜合相對磷脂提取量和對磷脂組成成分的影響分析,傳統(tǒng)提取方法中以MTBE法最佳,以1,2-二氯乙烷為萃取劑的改良Folch法中以1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法最佳。對于1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法和MTBE法,二者在提取不同種類樣品磷脂的優(yōu)劣對比上略有不同,但均為有效的磷脂提取方法,MTBE法對于樣品種類的適應性更廣,而1,2-二氯乙烷-甲醇(1:2,v/v)法則更加安全,更適用于食品加工行業(yè)。隨后,本文基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法和iKnife智能手術刀質(zhì)譜法3種新型脂質(zhì)組學技術,分別建立了針對海洋源副產(chǎn)物磷脂的檢測及分析方法,并簡要分析了各方法的優(yōu)劣性及適用范圍。以魷魚內(nèi)臟磷脂為樣品驗證液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法,樣品經(jīng)負離子全掃描實現(xiàn)分離鑒定和定量分析,共檢出17種磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine,PC)、10種磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine,PE)、9種磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI)、11 種磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS),磷脂C原子總數(shù)為32~40,總雙鍵數(shù)為0~7,并檢測到多種含ω-3多不飽和脂肪酸鏈的磷脂。以水產(chǎn)副產(chǎn)物磷脂為樣品驗證多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法,樣品采用流動注射直接進樣,經(jīng)三重四級桿質(zhì)譜母離子掃描和中性質(zhì)量丟失掃描對磷脂分子實現(xiàn)源內(nèi)分離鑒定和定量分析,共檢測出20種PC,21種PE,14種PI,14種PS,其中,磷脂C原子總數(shù)為16~22(溶血性磷脂)和32~44,雙鍵數(shù)為0~6,同時檢出多種含有二十碳五烯酸鏈(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸鏈(Docosahexaenoic acid,DHA)的磷脂。以金槍魚內(nèi)臟磷脂為樣品驗證iKnife智能手術刀質(zhì)譜法,在m/z 600~1000處得到清晰的磷脂質(zhì)譜圖,通過二級質(zhì)譜鑒定,該方法共檢出磷脂41種,質(zhì)量范圍為m/z 699.5~911.6,檢出磷脂亞類最多的是PI,共有13種。經(jīng)方法學驗證,上述3種脂質(zhì)組學方法均有良好的精密度,結果可重復。通過對比,3種方法各有特點,因此適用范圍略有差別:液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法適用于樣品量較多、對檢測速度要求不高、追求分析結果精確性時的脂質(zhì)定性、定量分析;多維度串聯(lián)質(zhì)譜鳥槍法適用于樣品量較少或?qū)z測時長有較高要求時的脂質(zhì)定性、定量分析,可用于建立樣品快速檢測方法;iKnife智能手術刀質(zhì)譜法適用于無需定量檢測時的脂質(zhì)輪廓分析,可對未知樣品進行實時鑒定與準確度評分。本課題可以進一步加深對海洋源副產(chǎn)物磷脂提取方面的研究,充分利用其生理生化特性、擴大其經(jīng)濟價值,還可以減少副產(chǎn)物資源浪費、降低環(huán)境壓力,對維護生態(tài)環(huán)境起到一定的作用。對新型脂質(zhì)組學技術的建立與開發(fā),能夠使脂質(zhì)組學研究更好地應用于食品科學,為該學科的研究提供新的思路,使其向更加多元化的方向發(fā)展。
【學位授予單位】:浙江工商大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:TS254.1
【圖文】:

脂質(zhì)


學;g.研究特定脂質(zhì)之間以及脂質(zhì)和蛋fi質(zhì)之間相互作用的功能脂質(zhì)代謝組學;h.神經(jīng)逡逑脂質(zhì)代謝組學等^逡逑目前,以脂質(zhì)組學為主題的文拿量總體呈現(xiàn)上升趨勢(圖1-2)。我國脂質(zhì)組學研究逡逑起步較晚,通過知網(wǎng)篇名檢索“脂質(zhì)組學”僅有論文100余篇,且大部分脂質(zhì)組學研宄:。鹤麇义霞性谏茖W與醫(yī)學領域,而脂質(zhì)組學在食品科學領域的研究則相對較少。因此,在食逡逑品科學領域內(nèi)開展脂質(zhì)組學的研究將為現(xiàn)代食品科技發(fā)展提供一個嶄新的視角。逡逑100-逡逑90-邐"逡逑80邋-邋?逡逑70-邐/逡逑栙60邋-逡逑|邐5。-邐/逡逑揭邋40-邐/逡逑30-逡逑i0-邐嚴—逡逑■邐■^^'■逡逑\邋%,邋%邋%邋\邋\邋\邋%邋%邋\邋\邋%%6戶%逡逑年份逡逑圖1-2邋2004-2017年脂質(zhì)組學相.關文章發(fā)表擺逡逑Fig.邋1-2邋Total邋number邋of邋publications邋on邋lipidomics邋in邋2004-2017逡逑1.4.3脂質(zhì)組學在食品科學領域的研究現(xiàn)狀逡逑1.4.3.1食品生物化學逡逑在食品生物化學方面,脂質(zhì)組學的研宄多與生物化學相結合,研究食品及食品原料中逡逑脂質(zhì)的組成成分、結構、理化性質(zhì)、功能等。Campos等[471在用薄層色譜法比較5個不同逡逑抗寒性的咖啡品種在低溫馴化后脂質(zhì)變化時發(fā)現(xiàn)

乙醇浸提法,對蝦頭,二氯乙烷,提取量


y/v)邋method;邋F.邋1,2-DCE-MeOH邋(1:1,邋v/v)邋method;邋G.邋1,2-DCE-MeOH邋(2:1,邋v/v)邋method;邋H.邋1,2-DCE逡逑method.逡逑如圖2-1所示,A?H邋8種不同提取方法對好頭磷脂的相對提取量分別為21.679±0.897%、逡逑38.505±1.196%、39.047±1.159%、11.750±0.966%、40.027±1.434%、21.913±1.488%、逡逑21.771±1.448%、13.163±0.623%。逡逑由圖可知,對于Bligh邋&邋Dyer法、Folch法、MTBE法、乙醇浸提法這4種傳統(tǒng)提取逡逑方怯來說,MTBE法和Folch法在對于蝦頭磷脂提取方面有著絕對的優(yōu)勢,且MTBE法比逡逑Folch法更勝一籌>邋相對的,乙醇浸提法對蝦頭磷脂的相對提取f堅恫蝗縉溆啵持址椒。辶x洗送,由诱浺醇浸提法也繗]糜詰鞍字侍崛。郟福福藎虼嗽諤崛」討幸自諏字謝烊氳鞍族義現(xiàn),而蛋白轴尙样不溶釉r郟福梗藎帽戀矸ㄎ薹ㄈコ,因创T蘊崛×坑幸歡ㄓ跋臁6藻義嫌冢,2-二录x彝椋狀擠ê停保玻紉襮<法,1,2-二氯乙烷-甲醇法的相對提取量隨著萃取混逡逑合液中1,2-二氯乙烷比例的增加而下降,當萃取混合液的比例為1,2-3氯乙q<-甲醇(1:2,逡逑v/v)時

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