【摘要】：紅汁乳菇(Lactarius hatsudake Tanaka)是世界著名的美味野生食用菌,紅汁乳菇分布于安徽、吉林、遼寧、江蘇、福建、廣東、廣西、四川、云南、貴州、西藏等地,夏秋生于松林中地上,該菌味道鮮美,可加工成菌油,或經(jīng)速凍后長期保,具有巨大的規(guī)模開發(fā)的市場前景。本文采用紅汁乳菇作為原材料,探討了紅汁乳菇多酚類化合物的超聲波輔助提取的工藝,并對其進(jìn)行了優(yōu)化。并通過體外試驗(yàn)研究了紅汁乳菇多酚的抗癌活性。在紅汁乳菇的超聲波輔助提取的工藝優(yōu)化中,以總酚含量為響應(yīng)值,選擇溶劑類型、溶劑濃度、料液比、超聲時間、提取次數(shù)等因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,得到擬合方程 Y = 4.83 + 0.13*A+ 0.30*B-0.037*C-0.089*A*B + 0.037*A*C-0.11*B*C-0.54*A2-0.16*B2-0.20*C2(A、B、C分別是時間、料液比及浸提液濃度),試驗(yàn)中這三個因素對提取多酚的顯著性影響大小分別是料液比提取時間浸提液濃度。通過對方程的求解,對方程進(jìn)行預(yù)測,并結(jié)合實(shí)驗(yàn)的參數(shù)設(shè)定要求,得到紅汁乳菇超聲波輔助提取的最佳工藝條件:提取時間80 min、乙醇濃度56%、料液比1:25(g/mL)、提取2次,在該條件下總酚得率為5.05mg/g。采用該工藝條件進(jìn)行提取,其實(shí)驗(yàn)結(jié)果與優(yōu)化結(jié)果誤差為1.05%。初步提取后的多酚物質(zhì)經(jīng)過AB-8大孔樹脂純化后,其多酚含量能達(dá)到139.46±5.42 mg/g,較粗體物有了較大的提升。純化后的紅汁乳菇多酚物質(zhì)通過分析型高效液進(jìn)行測定,高效液相分析條件為流速:1ml/min,溶劑為A液:0.1%甲酸、B液:乙腈,在梯度條件為0-2 min,8-10%乙腈;2-10 min,10-20%乙腈;10-30 min,20-80%乙腈;30-31 min,80-100%乙腈;31-40 min,100%乙腈;40-43 min,100-8%乙腈下進(jìn)行梯度洗脫,得到紅汁乳菇中多酚成分主要有:綠原酸、阿魏酸、沒食子酸、連苯三酚、肉桂酸、楊梅素、對羥基苯甲酸、尿黑酸和其它7種未知物質(zhì)。純化處理后的紅汁乳菇多酚的體外抗癌實(shí)驗(yàn)顯示,紅汁乳菇多酚在較低的濃度時就能有非常理想的結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116抑制活性。多酚化合物能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖,通過實(shí)驗(yàn)推測其抑制機(jī)理為:紅汁乳菇多酚純化物→MAPK信號通路受阻→AP-1和NFκB活性受到抑制→cyclin D1表達(dá)降低、CDKI表達(dá)提高→細(xì)胞周期受到抑制→HCT116細(xì)胞的增殖受阻;多酚化合物也能促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡,通過實(shí)驗(yàn)推測其抑制機(jī)理為:紅汁乳菇多酚純化物-→Bcl-2表達(dá)降低、Bax表達(dá)提高,Bcl-2/Bax比值減小→Caspase-3活化-→HCT116細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖１．２技術(shù)路線圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ邋ｒｏａｄｍａｐ逡逑

ＡＡＡＣＧＧＧＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＧＧＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＧＧＣＧＣＡＡＧＧＴＧＣ。將ＩＴＳ序列與美國國立生物技術(shù)信息中心（Ｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｅｎｔｅｒ邋ｆｏｒ邋Ｂｉｏｔｅｃｎｏａｔｉｏｎ）進(jìn)行比對后，驗(yàn)證其為紅汁乳燕。逡逑２紅汁乳菇的處理逡逑購買的新鮮的紅汁乳菇去除污泥后立即放入冰柜，，使其中的自由水在，將凍住的紅汁乳進(jìn)行凍干處理，凍干兩天后取出備用，用粉碎機(jī)粉碎目篩網(wǎng)篩取對應(yīng)孔徑紅汁乳菇粉末。逡逑３總酚含量測定逡逑汁乳菇中總酚測定采用Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法以沒食子酸作為對子酸按一定的濃度配制備，與Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ顯色劑２ｈ后，在７６０ｎ測定其吸光值，按含量和吸光度作出曲線，其回歸方程為ｙ邋＝邋０．０１４６７７，邋Ｒ２邋＝０．９９９７。用該曲線的方程便可以計算出總酚的含量。逡逑０邋８邋－逡逑
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R73-3;TS201.2

【參考文獻(xiàn)】

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4 熊俐;谷良富;;雙酶法預(yù)處理對菜籽餅多酚提取的影響[J];食品研究與開發(fā);2015年02期

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本文編號：2691388