【摘要】：胡蘿卜為傘形科草本植物,營養(yǎng)價值豐富,有“小人參”之美譽(yù)。益生菌是指一類對機(jī)體有益的活性微生物。本課題組前期工作中將益生菌NCU 116用于胡蘿卜的生物發(fā)酵,研發(fā)出一種新型發(fā)酵胡蘿卜果汁,同時發(fā)現(xiàn)益生菌發(fā)酵對胡蘿卜汁的營養(yǎng)成分及胡蘿卜多糖的功能活性均產(chǎn)生了一定影響。本論文以益生菌發(fā)酵前后胡蘿卜汁為對象,分別提取其中的水溶性多糖(發(fā)酵前的組分記為WSP-n,發(fā)酵后的組分記為WSP-p),對兩種多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及基本結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了初步研究。主要內(nèi)容歸納如下:(1)通過水提醇沉法提取得到益生菌發(fā)酵前后胡蘿卜汁中水溶性多糖(WSP-n與WSP-p),研究二者對環(huán)磷酰胺致免疫抑制模型小鼠免疫功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):WSP-n與WSP-p均能增加免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù),減緩脾臟腫大,增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞增殖能力,緩解環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠T細(xì)胞亞群分化紊亂,提高脾臟組織中細(xì)胞因子水平,增加小鼠血清中免疫球蛋白含量,WSP-p對免疫抑制小鼠健康改善作用強(qiáng)于WSP-n。(2)構(gòu)建環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠模型,從腸道黏膜損傷、腸道黏膜免疫及腸道代謝產(chǎn)物等方面,比較WSP-n與WSP-p對免疫抑制小鼠腸道健康的作用。結(jié)果表明:WSP-p對免疫抑制小鼠小腸組織病理形態(tài)的改善作用強(qiáng)于WSP-n;WSP-p能顯著提高免疫抑制小鼠的杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏蛋白面積,并具有劑量依賴性。WSP對小鼠CD4~+T細(xì)胞無顯著影響,中劑量WSP-n能使CD8~+T細(xì)胞含量顯著上升。高劑量WSP-p組對小鼠糞便含水量的恢復(fù)水平與模型組相比具有顯著性差異,效果較好。(3)對WSP-n與WSP-p進(jìn)行分離純化,分析所得多糖基本結(jié)構(gòu)特征差異。通過凝膠柱色譜結(jié)合大分子純化系統(tǒng),分別從WSP-n與WSP-p得到三個組分,前兩個組分以中性糖為主,第三個組分則主要為酸性糖。結(jié)果發(fā)現(xiàn):發(fā)酵前后胡蘿卜多糖紅外光譜圖相似,均呈現(xiàn)出典型的糖類特征吸收峰。WSP-n中的純化所得多糖相對分子質(zhì)量和多分散系數(shù)均大于WSP-p,二者之間的溶液構(gòu)象參數(shù)也有一定差異。單糖組成結(jié)果顯示W(wǎng)SP-n與WSP-p中純化多糖的單糖種類一致,但含量存在差異。固態(tài)形貌結(jié)果顯示W(wǎng)SP-n與WSP-p中各純化組分的微觀形態(tài)存在差異。上述結(jié)果表明,益生菌NCU 116發(fā)酵對胡蘿卜多糖的結(jié)構(gòu)特征產(chǎn)生了一定的影響。(4)由于現(xiàn)有單糖組成水解方法具有一定局限性,本論文提出一種新的水解方法對胡蘿卜多糖進(jìn)行單糖組成分析并對水解條件進(jìn)行了優(yōu)化。使用TFA進(jìn)行第一步水解后,除去TFA再用H_2SO_4進(jìn)行第二步水解,能在減少中性糖損失的情況下,盡可能使多糖中的糖醛酸得到釋放。以TFA濃度、時間及溫度為因素,利用單因素試驗和響應(yīng)面實驗對第一步TFA的水解條件進(jìn)行了優(yōu)化,第二步H_2SO_4水解條件采用本課題組前期工作中優(yōu)化過的最佳條件。分別使用傳統(tǒng)的一步水解法與本文中提出的兩步水解法進(jìn)行水解,比較實驗結(jié)果,發(fā)現(xiàn)兩步水解法測定得到的胡蘿卜中單糖總量比一步水解法高18.87%。
【圖文】：

3.4 結(jié)果與討論3.4.1 WSP-n 與 WSP-p 對小腸組織病理結(jié)構(gòu)的影響小鼠小腸組織病理結(jié)構(gòu)形態(tài)如圖3.1所示。正常組小鼠的小腸絨毛排列整齊、無破損，模型組小鼠的小腸絨毛有明顯變短萎縮現(xiàn)象。通過 Image Pro 軟件對小腸組織中絨毛長度、隱窩深度及腸壁厚度進(jìn)行測量，結(jié)果見圖 3.2。從圖 3.2 可看出，模型組的絨毛長度、隱窩深度及腸壁厚度均顯著低于正常組，多糖灌胃組相較于模型組而言有一定回升。整體而言，相同劑量下，WSP-p 對免疫抑制小鼠小腸組織病理形態(tài)的改善作用強(qiáng)于 WSP-n。28

第 4 章 益生菌發(fā)酵對胡蘿卜水溶性多糖基本結(jié)構(gòu)特征的影響色，，小腸絨毛外圍紫色區(qū)域為黏蛋白。對每根完整小長絨毛的小腸杯狀細(xì)胞數(shù)量和黏蛋白面積進(jìn)行測定，結(jié)果見圖 3.4。模型組小鼠的小腸杯狀細(xì)胞數(shù)與黏蛋白面積均顯著低于正常組，中、高劑量的 WSP 能使免疫抑制小鼠的小腸杯狀細(xì)胞顯著上升，WSP-p 對小鼠的作用存在劑量依賴性，其中改善效果最好的是高劑量 WSP-p。同時，WSP-p 對小鼠黏蛋白面積的提升作用具有劑量依賴性，其中僅高劑量組具有顯著性，改善效果最好。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.4

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