發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 00:26

【摘要】：牦牛骨中有豐富的膠原蛋白,為了合理的開發(fā)利用牦牛骨資源,本文以牦牛骨為原材料提取牦牛骨膠原蛋白,并以DPPH·和OH·自由基清除率為指標(biāo)制備牦牛骨膠原抗氧化肽,以ACE酶活性抑制率為指標(biāo)制備ACE抑制肽,并對(duì)所制備的牦牛骨膠原蛋白肽進(jìn)行純化。具體工作內(nèi)容如下:1.在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以牦牛骨膠原蛋白提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo),根據(jù)Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,采用超高壓耦合酸酶法提取牦牛骨膠原蛋白工藝,得出最佳工藝條件:采用石油醚脫脂2 h,使用0.5%EDTA溶液進(jìn)行脫鈣處理36 h,超高壓處理壓力為350 MPa、處理時(shí)間為10 min,酶用量0.4 g/mL、固液比為1:290 g/mL、提取時(shí)間為10.5 h,實(shí)際測(cè)得提取率為58.95%。2.分別以DPPH·清除率和OH·清除率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),根據(jù)Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,得出DPPH·清除率的最佳工藝條件:底物濃度為25 g/L,反應(yīng)時(shí)間1.8h,pH值8.0,酶用量33μL時(shí),得到的DPPH·自由基清除率為32.51%。OH·清除率的最佳工藝條件:底物濃度為25 g/L,反應(yīng)時(shí)間1.0h,pH值8.4,酶用量45μL時(shí),得到的OH·自由基清除率為74.51%。并采用制備型高效液相色譜法對(duì)牦牛骨膠原蛋白抗氧化肽進(jìn)行純化,得到三個(gè)有效組分,最優(yōu)組分對(duì)OH·清除率為40.76%。3.以ACE酶活性抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采根據(jù)Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理優(yōu)化牦牛骨膠原ACE抑制肽制備工藝,得出最佳工藝條件:底物濃度為10 g/L,為反應(yīng)時(shí)間1.0 h、pH值8.3、反應(yīng)溫度42℃,得到ACE活性抑制率為83.52%。并采用制備型高效液相色譜對(duì)牦牛骨膠原ACE抑制肽進(jìn)行純化,得到三個(gè)組分,分別對(duì)三個(gè)組分進(jìn)行體外消化模擬實(shí)驗(yàn),對(duì)模擬消化后產(chǎn)物測(cè)定ACE酶活性抑制率,最優(yōu)組分對(duì)ACE酶活性抑制率為75.15%。
【圖文】：

世界的牦牛數(shù)量約有 1400 萬(wàn)頭，其中百分之九地區(qū)，除中國(guó)外，蒙古、印度、不丹、阿富汗、3]。青海省擁有牦牛 490 萬(wàn)頭，占全國(guó)總數(shù)的 3能力極強(qiáng)，耐苦、耐寒、耐饑、耐渴，能在零下5-55435.28 Pa，氧分壓為 14505.43-11679.01 Pa，環(huán)境條件下生存[5]。在鮮草短缺的季節(jié)，牦牛依短草為食。牦牛被稱為“高原之舟”，能為高原物資，是高原地區(qū)一種不可或缺的生物資源。地區(qū)的牦牛主要以青藏高原牦牛為主，其體態(tài)結(jié)牦牛頭大，額寬，角粗，皮松厚，前肢短而端正長(zhǎng)毛蓬松。成年牦牛平均體重為 370 kg，屠宰率牦牛年產(chǎn)乳量 270 kg 以上，乳脂率 6%以上，成為 137 kg[6-11]。

牦牛骨膠原蛋白肽的制備及其功能特性研究身是螺旋結(jié)構(gòu)，，肽鏈上的三個(gè)氨基酸殘基通過(guò)三個(gè)螺旋的中心區(qū)域，形成的細(xì)窄，只有甘氨酸能進(jìn)入這個(gè)位置[34]，所以膠原蛋白形成 Gal-Glu-X 的氨排列形式。三個(gè)肽鏈借助范德華力、氫鍵和共價(jià)交聯(lián)鍵，相互旋轉(zhuǎn)，纏繞以和右手螺旋的方式形成三股螺旋結(jié)構(gòu)，使膠原具有較高的拉伸強(qiáng)度。組成膠白的分子呈平行束狀排列，通過(guò)共價(jià)交聯(lián)可形成穩(wěn)定的膠原纖維[39]。膠原分過(guò)分子內(nèi)或分子間交聯(lián)作用形成不溶性纖維[35-38]。膠原分子之間通過(guò)組氨酸氨酸之間的共價(jià)交聯(lián)，這種交聯(lián)通常發(fā)生在膠原分子的 C 端或 N 端之間[40]。
【學(xué)位授予單位】：青海師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS201.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2676843