【摘要】：乳清蛋白水解物及其生物活性肽具有多種生物活性,特別是其調(diào)節(jié)血糖的功效受到廣泛關(guān)注,具有極高的研究價值。乳清蛋白主要由β-乳球蛋白和α-乳白蛋白組成,其中還含有高濃度的支鏈氨基酸,是生物活性肽的極佳來源。近年來研究表明,水解后乳清蛋白中的活性肽段,可抑制二肽基肽酶-IV(Dipeptidyl Peptidase-IV,DPP-Ⅳ)的活性從而促進胰高糖素樣肽分泌,改善血糖調(diào)節(jié)并抑制食物攝入。本研究選用人體消化常見胃蛋白酶及胰蛋白酶水解的乳清蛋白水解物及苦瓜皂苷,通過單因素試驗確定各影響因素對乳清蛋白水解度及水解物DPP-Ⅳ抑制率的影響,借助響應(yīng)面方法對水解條件進行優(yōu)化;比較水解過程中游離氨基酸含量變化;測定苦瓜皂苷的DPP-Ⅳ抑制活性,結(jié)合乳清蛋白水解物優(yōu)化的試驗結(jié)果,對其協(xié)同作用進行研究,并測定消化后水解物及苦瓜皂苷DPP-Ⅳ抑制活性的變化。主要結(jié)論如下:(1)乳清蛋白胃蛋白酶水解物具有DPP-Ⅳ抑制活性,其水解度與DPP-Ⅳ抑制率在不同水解時間、不同酶與底物比的條件的趨勢不同。單因素試驗確定較優(yōu)的水解條件組合為水解時間2 h、水解pH值為2.5、胃蛋白酶與底物比為4%。響應(yīng)面試驗分析得出最佳水解條件,水解液pH值2.69、水解時間2.05 h、酶與底物比4%,計算得該條件下乳清蛋白胃蛋白酶水解物抑制DPP-Ⅳ的IC_(50)值為5.77 mg/mL。乳清蛋白胰蛋白酶水解物均具有DPP-Ⅳ抑制活性,其水解度與DPP-Ⅳ抑制率在不同水解時間、不同酶與底物比的條件下,趨勢不同。單因素試驗確定了較優(yōu)的水解條件水解時間4 h、水解pH值為8、胰蛋白酶與底物比為4%。響應(yīng)面試驗分析,得出最佳水解條件即水解液pH值7.92、水解時間3.99 h、酶與底物比4%,計算得該條件下乳清蛋白胃蛋白酶水解物抑制DPP-Ⅳ的IC_(50)值為7.28 mg/mL。(2)胃蛋白酶水解物中游離氨基酸總含量為47.00 mg/mL經(jīng)過模擬胃消化及腸消化后游離氨基酸總含量分別升高至60.08 mg/g及57.99 mg/g其中亮氨酸含量較高,胰蛋白水解物中游離氨基酸總含量為42.95 mg/g經(jīng)過模擬胃消化及腸消化后游離氨基酸總含量分別升高至58.12 mg/g及52.87 mg/g,其中酪氨酸含量顯著高于其余氨基酸(P0.05)。(3)苦瓜皂苷具有DPP-Ⅳ抑制活性,苦瓜皂苷抑制DPP-Ⅳ的IC_(50)值為5.20 mg/mL,苦瓜皂苷與水解物比例為1:1混合時抑制效果顯著高于兩者單獨累加(P0.05),具有一定的協(xié)同作用。通過對模擬胃腸道消化的乳清蛋白胃蛋白酶水解物、乳清蛋白胰蛋白酶水解物及苦瓜皂苷DPP-Ⅳ抑制率的比較,三種樣品經(jīng)模擬胃腸消化前后其抑制率均發(fā)生改變,乳清蛋白胃蛋白酶水解物模擬胃消化后抑制率顯著降低(P0.05),而經(jīng)模擬腸道消化后抑制率顯著升高(P0.05);乳清蛋白胰蛋白酶水解物模擬胃消化后抑制率顯著升高(P0.05),而經(jīng)模擬腸道消化后抑制率顯著降低(P0.05);苦瓜皂苷模擬胃消化后抑制率顯著升高(P0.05),而經(jīng)模擬腸道消化后抑制率顯著下降(P0.05)。綜上所述,體外試驗結(jié)果表明兩種乳清蛋白水解物及苦瓜皂苷均具有抑制DPP-Ⅳ的活性。確定了胃蛋白酶與乳清蛋白酶水解物DPP-Ⅳ抑制率最高的水解條件組合,推算得兩種水解物的IC_(50)值,對其進行模擬胃腸道試驗,消化前后水解液中游離氨基酸含量與DPP-Ⅳ抑制率均發(fā)生變化。推算得苦瓜皂苷IC_(50)值,為苦瓜皂苷調(diào)節(jié)血糖機理研究提供了參考,對于乳清及苦瓜的深加工、及其調(diào)節(jié)血糖活性的應(yīng)用有重要意義。
【圖文】：

A 2.5361E-05 1 2.5361E-05 0.4797972 0.51083276B 3.8693E-06 1 3.8693E-06 0.073202 0.79453428C 5.4732E-05 1 5.4732E-05 1.0354511 0.34275549AB 0.00017276 1 0.00017276 3.26829522 0.11357302AC 0.00024724 1 0.00024724 4.67750991 0.06733346BC 1.6366E-05 1 1.6366E-05 0.30962289 0.59524396A20.00010436 1 0.00010436 1.97436826 0.20277649B20.00028238 1 0.00028238 5.34216138 0.05408219C20.00104663 1 0.00104663 19.8007972 0.00297233 **殘差 0.00037001 7 5.2858E-05失擬項 0.00027488 3 9.1628E-05 3.85304566 0.11273014 不顯著純誤差 9.5123E-05 4 2.3781E-05總和 0.00244902 16注：*表示差異顯著（P ），，**表示差異極顯著（P ）。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.2

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