【摘要】：近年來,海洋生物活性肽以其安全無毒優(yōu)良特點(diǎn)在食品保健品領(lǐng)域嶄露頭角,日本黃姑魚(Nibea japonica)營養(yǎng)豐富,味道鮮美,在其食品生產(chǎn)及精制過程中產(chǎn)生的魚皮、魚鱗等副產(chǎn)品具有高附加利用價值;本課題以日本黃姑魚皮為原料,優(yōu)化日本黃姑魚皮活性肽的酶解制備工藝,研究其體內(nèi)外免疫活性,以期為進(jìn)一步研究其應(yīng)用提供基礎(chǔ)。本課題采用蛋白酶水解法,以酶解產(chǎn)物對RAW 264.7細(xì)胞相對增殖率的影響為指標(biāo),通過篩選蛋白酶實(shí)驗(yàn)、單因素實(shí)驗(yàn)、響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化日本黃姑魚皮活性肽的酶解制備工藝,并對酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾分離,采用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)篩選活性最高的分子量區(qū)間肽命名為日本黃姑魚皮活性肽(Nibea japonica skin active peptides,NJSAP);通過MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、觀察細(xì)胞形態(tài)變化、中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)、一氧化氮(NO)分泌量的測定、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)分泌量的測定來考察NJSAP在體外作用于RAW 264.7細(xì)胞的免疫活性;通過腹腔注射建立環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠免疫抑制模型,模型建立成功后,灌胃100、200、400 mg/kg的NJSAP連續(xù)25天,通過記錄小鼠體重變化、計算臟器指數(shù)變化、ConA誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、測定半數(shù)溶血值(HC _(50))、測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力、測定血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)含量、測定血清中總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力、過氧化氫酶(CAT)活力以及HE染色小鼠脾臟來考察NJSAP在體內(nèi)免疫活性。結(jié)果顯示:酶解日本黃姑魚皮最適蛋白酶為中性蛋白酶,最佳酶解條件是pH為7,溫度45.5℃,時間5.5 h,加酶量1500 U/g,液料比10:1(mL/g),在此酶解工藝下所得酶解產(chǎn)物作用于RAW 264.7的相對增殖率為57.47%,并且經(jīng)超濾分離得到3kDa的組分活性最高;12.5~500μg/mL濃度范圍內(nèi)的NJSAP能使RAW 264.7細(xì)胞的相對增殖率增高,NJSAP還能使RAW 264.7細(xì)胞伸出偽足出現(xiàn)分化,并且促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞吞噬能力以及分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-12的能力;不同劑量的NJSAP能使免疫低下的小鼠體重、臟器指數(shù)明顯上升;小鼠足跖厚度差值及脾淋巴細(xì)胞顯著增強(qiáng),說明NJSAP可促進(jìn)小鼠細(xì)胞免疫;半數(shù)溶血值顯著性增加,說明NJSAP可促進(jìn)小鼠體液免疫;腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力明顯增加,說明NJSAP能促進(jìn)小鼠的特異性免疫;血清中TNF-α、IgG、IgA、IgM含量、T-AOC、含量及SOD、CAT活力明顯增加,血清中MDA含量降低,HE染色顯示小鼠脾臟有所恢復(fù)。綜上所述,NJSAP具有一定的免疫活性,并能提高小鼠的免疫力,這為進(jìn)一步研究NJSAP提供了理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖1-1日本黃姑魚Fig.1-1Nibeajaponica

技術(shù)路線
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS254.9

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本文編號：2655162