新型樣品前處理方法研究及其在真菌毒素分析中的應用

發(fā)布時間：2020-04-17 07:56

【摘要】：真菌毒素是由帶染在食物或飼料中生長的真菌產(chǎn)生的代謝物。當糧食谷物在收獲時沒有充分干燥,或在儲存和運輸過程中溫度或濕度過高時,污染糧食的真菌就會迅速生長并同時產(chǎn)生毒素。真菌毒素會影響多種作物,這些作物大多數(shù)是人類和動物主要消費的商品。真菌的生長依賴于適當?shù)沫h(huán)境條件,會造成真菌毒素產(chǎn)生在不同的地理區(qū)域,但食品貿(mào)易的全球化使得真菌毒素也成為一個世界性的問題。因此,快速靈敏檢測真菌毒素對于食品、衛(wèi)生、健康領域具有重要意義。然而,真菌的代謝過程錯綜復雜,每一類毒素都還存在為數(shù)眾多的修飾形體,我們稱之為隱匿形態(tài)的真菌毒素�，F(xiàn)行標準方法均僅針對少數(shù)幾種毒素分析物,對隱匿形態(tài)的毒素未給予關注。由于樣品基質(zhì)復雜,分析物含量低,且實際樣品的分析檢測中還有許多亟待解決的難題。真菌毒素的檢測研究一直是分析化學的研究熱點。因此,開發(fā)靈敏度高,準確性好的真菌毒素檢測新方法是有非常必要的。隨著人們發(fā)現(xiàn)的真菌毒素的種類越來越多,對病理毒理的研究日益深入,對分析檢測的靈敏度和準確度提出了更高的要求。目前,真菌毒素的分析方法包括以免疫化學為基礎的技術和以色譜為基礎的技術。以免疫化學為基礎的技術主要應用于常規(guī)控制和快速、現(xiàn)場檢測;以及以色譜為基礎的技術,除了通過串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定新的或修飾的化合物外,還可實現(xiàn)真菌毒素的靈敏、準確和選擇性的測定。但由于真菌毒素在實際樣品中含量極低,常常需要采用樣品前處理富集凈化和化學衍生增敏等手段,提高方法的靈敏度。本論文采用兩種金屬有機框架材料(MOFs)作為分散固相萃取的吸附劑用于樣品前處理,并利用三種衍生試劑應用于食品飼料中真菌毒素的柱前衍生,結合高效液相色譜-熒光檢測(HPLC-FLD)方法建立了靈敏測定伏馬毒素、赭曲霉毒素和玉米赤酶烯酮的新方法。具體工作內(nèi)容如下:第1章:簡要介紹了真菌毒素的產(chǎn)生背景、分布情況、主要種類,對人類和動物的危害,以及當今對真菌毒素的研究現(xiàn)狀。同時,簡述了樣品前處理和柱前衍生在真菌毒素檢測中的應用。第2章:成功制備并表征了MOFs材料UiO-66,以UiO-66作為分散固相萃取劑,建立了快速富集兩種赭曲霉毒素的萃取方法,結合丹磺酰氯(Dansyl-Cl)衍生化實現(xiàn)了靈敏的HPLC-FLD檢測。成功地實現(xiàn)了植物油中的兩種赭曲霉毒素快速靈敏的定性定量分析。第3章:成功制備并表征了MOFs材料MIL-101,以MIL-101作為吸附劑,建立了分散固相萃取方法,用于兩種伏馬毒素的富集。借助實驗室制備的柱前衍生試劑1-甲基菲并咪唑-2-苯甲酰琥珀酰亞胺活性酯(PBIA-Osu)進行衍生化實現(xiàn)熒光檢測。并將該方法應用于實際樣品的檢測。結果表明,該方法可以快速高效的測定飼料中的兩種伏馬毒素。第4章:制備并表征了適用于羰基標記的新型衍生試劑N-丁基-1,8-萘二酰亞胺-4-肼(NBHNA)。NBHNA本身沒有熒光信號,它與羰基化合物結合后,產(chǎn)生turn-on型熒光響應。以NBHNA作為柱前衍生試劑,成功用于玉米赤酶烯酮的快速標記,衍生物的熒光信號比玉米赤酶烯酮的固有熒光大大增強�；贜BHNA衍生化的HPLC-FLD方法的檢測靈敏度大大提高,檢測限可達0.1μmol/L水平。
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