【摘要】：肥胖是一個嚴重影響人類生活品質(zhì)、讓社會承受巨大負擔(dān)的難題。治療肥胖的藥物大多對人體有不良的副作用,用植物來源的天然產(chǎn)物來進行膳食干預(yù)是一種相對健康、安全的方式。近年來,肥胖被證明與腸道菌群密切相關(guān),這為肥胖的預(yù)防和治療提供了一個新的思路。荷葉(Lotus leaf)是一種藥食兩用、產(chǎn)量豐富的資源,其富含生物堿、黃酮等活性物質(zhì),具有多種生物學(xué)功效。本文研究了荷葉生物堿鹽的提取、純化方法,探究了荷葉生物堿鹽提取物(LLAS)預(yù)防小鼠高脂膳食誘導(dǎo)型肥胖(DIO)的功效及其對腸道菌群的影響。(1)采用單因素實驗和響應(yīng)面分析相結(jié)合的方法優(yōu)化了荷葉生物堿鹽的提取方案。優(yōu)化后的方案為:加熱溫度60℃、超聲功率500W、鹽酸質(zhì)量分數(shù)0.3%,超聲時間41min,液固比27:1,此條件下荷葉堿得率為(4.12±0.05)mg/g,與預(yù)測值的誤差小于1%。(2)采用大孔樹脂純化荷葉生物堿鹽粗提物。考察了四種大孔樹脂的吸附、解吸性能以及最大上樣量,最大上樣流速等指標。最終選取D101型大孔樹脂進行純化,2BV/h為最大流速,6BV為最大上樣量,30%體積分數(shù)的乙醇作為除雜液,70%體積分數(shù)的乙醇作為洗脫液。純化后總生物堿的純度為40.80%,回收率為81.71%。(3)采用高脂膳食誘導(dǎo)肥胖小鼠模型,用高(80mg/kg/d)、低(40mg/kg/d)兩種劑量的LLAS對小鼠進行膳食干預(yù)。結(jié)果表明:高、低劑量的LLAS均顯著(p0.001)降低了高脂膳食小鼠(MC小鼠)的體重,顯著(p0.05)減少了附睪脂肪、肝臟等器官和組織的脂肪堆積,顯著(p0.05)降低了小鼠的攝食量,顯著(p0.05)降低了血清中甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量,顯著(p0.05)升高了密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量,沒有影響血清中總膽固醇(T-CHO)的含量,顯著(p0.05)提高了胰脂肪酶的活性;低劑量的LLAS顯著(p0.05)改善了MC小鼠對胰島素的敏感性;高劑量的LLAS顯著(p0.05)提高了肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的含量,顯著(p0.005)降低了肝臟中丙二醛(MDA)的含量;高劑量的LLAS顯著(p0.005)降低了MC小鼠附睪脂肪組織中腫瘤壞死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白細胞介素-6(IL-6)、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)的含量。(4)采用Illumina PE250高通量測序技術(shù)分析了LLAS對MC小鼠腸道微生物豐富、多樣性、菌群組成等方面的影響。結(jié)果表明:高脂膳食會降低腸道菌群的豐富度和多樣性,而LLAS對MC小鼠腸道菌群豐富度和多樣性的影響不明顯;高脂膳食的厚壁菌門(Firmicutes)與擬桿菌門(Bacteroidetes)的比值顯著(p0.005)增高,高劑量的LLAS使該比值顯著(p0.05)降低;高劑量的LLAS能夠顯著(p0.05)降低高致病菌變形菌門(Proteobacteria)的相對豐度,顯著(p0.01)增加腸道益生菌阿克曼菌屬(Akkermansia muciniphila)的相對豐度,降低有害菌脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)的相對豐度,其對酸桿菌(Lactobacillus)和雙歧桿菌(Bifidobacterium)相對豐度的影響不明顯;LLAS能增加高脂膳食小鼠腸道中考拉桿菌屬(Phascolarctobacterium)、柔嫩梭菌屬(Faecalibacterium)、羅斯伯里氏菌屬(Roseburia)、Odoribacter等四種能產(chǎn)生短鏈脂肪酸的菌屬的相對豐度,間接作用于中樞神經(jīng),調(diào)控食欲。綜上所述,經(jīng)過提取、純化后的荷葉生物堿鹽提取物對高脂膳食誘導(dǎo)肥胖型小鼠的膳食干預(yù)取得了良好的效果,表現(xiàn)在其有效抑制了MC小鼠體重的過度增長、提高了其對胰島素的敏感性、提高了其肝臟的抗氧化水平、降低了其脂肪組織中炎癥因子的水平。此外,LLAS對MC小鼠的膳食干預(yù)能調(diào)節(jié)其腸道菌群的結(jié)構(gòu),改善腸道微生態(tài)。故推測LLAS預(yù)防肥胖的機制可能是抑制胰脂肪酶、調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu),進而緩解慢性炎癥反應(yīng),抑制食欲。
【圖文】：

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 第一章 緒論5圖1.1 荷葉中生物堿的結(jié)構(gòu)Figure 1.1 Structure of alkaloids in lotus leaves1.2.2 生物堿的提取大部分荷葉中的生物堿類物質(zhì)堿性較弱，，水溶性較差，可溶于甲醇、乙醚、氯仿等有機溶劑以及酸性溶液[46-47]。傳統(tǒng)的溶劑提取法提取率較低，因此常用酶解[48]、超聲[49]、微波[50]等方法來提高其提取率。蔣益虹[51]使用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和正交實驗相結(jié)合的方法優(yōu)化了荷葉生物堿的提取方法，首先通過正交實驗得出了影響荷葉生物堿提取效果的主次因素，再建立神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型來對方案進行評估和優(yōu)化，結(jié)合實際情況最終得出提取工藝參數(shù)為：pH為2.5，提取溫度為85℃，提取時間為1.75h

?第二章 響應(yīng)面法優(yōu)化荷葉生物堿鹽提取工藝及其純化22圖2.1 荷葉堿的標準曲線Figure 2.1 Standard curve of Nuciferine2.3.2 UPLC 分析荷葉生物堿如圖2.2所示，從左到右依次為O-去甲基荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、荷葉堿的出峰，各標準品峰形穩(wěn)定，分離度較好。各標準品的標準曲線如圖2.3所示，三種標準品的擬合度高。圖2.2 標準品UPLC圖譜Figure 2.2 UPLC chromatogram of standard alkaloids
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.4

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1 羅峰;方克敏;唐律平;李純偉;彭彥茜;吳盛林;喻詠婧;王哲;方會龍;;荷葉生物堿的提取工藝[J];湘南學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

2 李O

本文編號：2615110