【摘要】：乳制品是人們生活中的重要消費(fèi)品,鮮牛乳質(zhì)量在很大程度上影響著乳制品的質(zhì)量,病原菌污染是生乳質(zhì)量安全問(wèn)題的重要方面。近年來(lái),奶牛真菌性乳腺炎發(fā)生率明顯增高,有關(guān)鮮牛乳被念珠菌污染的報(bào)道越來(lái)越多。鮮牛乳中的致病性念珠菌不僅破壞乳品的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì),還存在導(dǎo)致人畜感染念珠菌病的風(fēng)險(xiǎn)。所以,在對(duì)原料乳中念珠菌分離鑒定的基礎(chǔ)上建立特異、靈敏和快速的檢測(cè)方法,對(duì)奶牛念珠菌性乳腺炎的診治和乳品安全都具有重要意義。本研究從冀南地區(qū)的奶牛場(chǎng)隨機(jī)采集了96份奶樣,首先用平板培養(yǎng)和形態(tài)觀察方法分離出15個(gè)疑似念珠菌菌株,后采用rDNA-ITS基因序列分析與形態(tài)學(xué)結(jié)合的方法鑒定出12株念珠菌:其中白色念珠菌8株、近平滑念珠菌2株、光滑念珠菌2株,其余3株為非念珠菌酵母狀真菌。念珠菌分離株與GenBank中三種念珠菌的同源性在97.6%~99.8%之間。本研究以天冬氨酸蛋白酶、細(xì)胞外磷脂酶和細(xì)胞外脂肪酶為指標(biāo)進(jìn)行分泌型水解酶檢測(cè)試驗(yàn),從而了解其主要毒力因子及強(qiáng)弱。結(jié)果顯示白色念珠菌和近平滑念珠菌均能產(chǎn)生天冬氨酸蛋白酶、細(xì)胞外磷脂酶和細(xì)胞外脂肪酶,光滑念珠菌主要產(chǎn)生細(xì)胞外磷脂酶;通過(guò)對(duì)三種念珠菌分泌型水解酶的活性比較來(lái)看,可以初步判定白色念珠菌的毒性最強(qiáng)。再選取分泌型水解酶活性最強(qiáng)的白色念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌進(jìn)行小鼠生存實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:注射白色念珠菌的小鼠存活率為10%;注射近平滑念珠菌的小鼠存活率為80%;注射光滑念珠菌的小鼠存活率為60%。進(jìn)一步驗(yàn)證了白色念珠菌的毒性最強(qiáng)。通過(guò)牛奶中厚垣孢子形成和滅菌試驗(yàn)得知,光滑念珠菌在室溫下的牛奶中不產(chǎn)生厚垣孢子,白色念珠菌和近平滑念珠菌在室溫下的牛奶中容易產(chǎn)生厚垣孢子雖然高壓滅菌可將其殺死但巴氏滅菌后厚垣孢子仍會(huì)存活。巴氏滅菌結(jié)果顯示在該試驗(yàn)條件下白色念珠菌厚垣孢子的生成率為9.69%~24.23%,近平滑念珠菌厚垣孢子生成率為16.17%~16.38%。針對(duì)GenBank已發(fā)表的benAfum基因序列設(shè)計(jì)了白色念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌的三對(duì)特異引物,并建立了檢測(cè)鮮牛乳中三種念珠菌的SYBR Green I熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示:該方法能同時(shí)擴(kuò)增出三種念珠菌的特異性目的片段,無(wú)引物二聚體,且菌種間的Tm值差異大于等于1℃即可區(qū)分;檢測(cè)白色念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌的靈敏度分別達(dá)到了1.63?10~1CFU/mL、1.61?10~1CFU/mL、1.65?10~1CFU/mL,高于常規(guī)PCR技術(shù)100倍以上;重復(fù)性試驗(yàn)熒光曲線和熔解曲線趨于一致;檢測(cè)速度快,2h即可完成。
【圖文】：

圖 2-1 疑似念珠菌不同培養(yǎng)基上的形態(tài)觀察Fig.2-1 Morphological observation on different media of suspected Candi圖 2-2 疑似念珠菌鏡檢下的形態(tài)觀察（400×） Morphological observation of suspected Candida microscopic examinatio 2-3 所示，將通疑似菌株分別在含有玉米吐溫培養(yǎng)基上的載玻的疑似念珠菌厚垣孢子的生長(zhǎng)狀態(tài)。

圖 2-2 疑似念珠菌鏡檢下的形態(tài)觀察（400×） Morphological observation of suspected Candida microscopic examinatio 2-3 所示，將通疑似菌株分別在含有玉米吐溫培養(yǎng)基上的載玻的疑似念珠菌厚垣孢子的生長(zhǎng)狀態(tài)。圖 2-3 疑似念珠菌厚垣孢子的形態(tài)觀察（400×）ig.2-3 Morphological observation of suspected Candida thick spores（400鑒別培養(yǎng)種顯色培養(yǎng)基的結(jié)果（圖 2-4）可以初步鑒定出白念珠菌 8 株 株，光滑念珠菌 2 株，，其它酵母狀真菌 3 株。
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：TS252.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬黎民;周平;;1298例兒童皮膚念珠菌病的臨床分析[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2009年01期

2 姚志榮;凌波;姜嬡芳;陳潔;陶建鳳;祁懷山;干皆誠(chéng);余紅;;兒童皮膚念珠菌病的臨床研究[J];中華皮膚科雜志;2006年02期

3 賈春暉;孫世奇;;雛鴨念珠菌病的診治[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2006年08期

4 燕麗,馬琳;小兒念珠菌病的臨床表現(xiàn)及治療[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2005年06期

5 許惠;雞念珠菌病的防治[J];農(nóng)家參謀;2004年06期

6 陸元會(huì);雞念珠菌病的診治[J];畜牧與獸醫(yī);2004年08期

7 陸元會(huì);雞念珠菌病[J];廣西畜牧獸醫(yī);2004年05期

8 于金玲,劉孝剛,張玉科,李樹(shù)閣;雞念珠菌病的診治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2004年12期

9 蘇顯鋒,戚鳴,劉玉梅,劉興濤,王麗華,程玉峰;雛鴨念珠菌病的診治[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2003年09期

10 符連萍,周秋平;鴿念珠菌病的診治[J];養(yǎng)禽與禽病防治;2003年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 林元珠;張?jiān)?朱敬先;;念珠菌病的臨床研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 蕭伊倫;王家俊;李莉;章強(qiáng)強(qiáng);;深在型皮膚念珠菌病1例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

3 蔡晴;劉維達(dá);;先天性皮膚念珠菌病[A];2012全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 劉啟文;李建紅;;兒童皮膚念珠菌病的臨床分析[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

5 張?jiān)?戴鴻薇;陶靜華;林元珠;;念珠菌病的診斷與防治的近況[A];第二屆全國(guó)深部真菌感染學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

6 苗國(guó)英;魏改云;張西克;吳平;;伊曲康唑治療丘疹型念珠菌病2例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

7 周艷;顧麗群;任祺;;特比萘芬治療外陰念珠菌病50例療效觀察[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

8 邵敏華;;女性念珠菌病與滴蟲(chóng)病及淋病患者合并支原體感染研究[A];2002中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

9 鄭岳臣;鄔焱卿;黃文英;毛葉紅;曾敬思;連昕;馮愛(ài)平;白逢彥;;夫妻同患念珠菌病的臨床菌學(xué)特征及流式細(xì)胞儀FCM檢測(cè)[A];2012全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

10 王海俊;王立新;田新榮;顧耀芳;;早產(chǎn)新生兒培養(yǎng)箱內(nèi)皮膚念珠菌病發(fā)病15例臨床分析[A];2001年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 河間市畜牧水產(chǎn)局 付金香;一例肉雛鴨念珠菌病的防治[N];河北科技報(bào);2017年

2 楊?lèi)?ài)起;鴿念珠菌病的診治[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

3 何更田;雞念珠菌病[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

4 熊繡杰;治念珠菌病三種病[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

5 北京世紀(jì)壇醫(yī)院皮膚性病科 周平;夫妻間可傳染念珠菌病[N];保健時(shí)報(bào);2010年

6 上海市楊浦區(qū)中心醫(yī)院皮膚科 副主任醫(yī)師 曹來(lái)安;怎樣防治嬰兒皮膚念珠菌病[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

7 姚春德;肉鴿念珠菌病的防治[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

8 中國(guó)青年報(bào)·中青在線記者 張茜;別慌!并非所有耳念珠菌都是“超級(jí)真菌”[N];中國(guó)青年報(bào);2019年

9 北京偉嘉集團(tuán) 錢(qián)大勇;雞腹瀉的原因與防治[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 劉建釵;禽源念珠菌分子分型及其致病性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

2 李勁松;深部念珠菌的基因診斷、分子分型及耐藥機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 宋闊闊;鮮牛乳中念珠菌分離鑒定及檢測(cè)方法建立[D];河北工程大學(xué);2019年

2 朱玲;念珠菌血流感染流行病學(xué)特征及病死率危險(xiǎn)因素分析[D];上海交通大學(xué);2016年

3 劉玉清;中西醫(yī)治療外陰陰道念珠菌病的研究進(jìn)展[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2614597