【摘要】：近年來(lái),抗菌類(lèi)獸藥在畜牧業(yè)中的廣泛使用導(dǎo)致乳中獸藥殘留成為影響乳及乳制品質(zhì)量安全的重要問(wèn)題,β-內(nèi)酰胺抗生素及抑制劑等獸藥殘留同步檢測(cè)及快速篩查是控制乳及乳制品安全質(zhì)量的重要一環(huán)。飛行時(shí)間質(zhì)譜是高分辨質(zhì)譜,可方便快速地完成目標(biāo)化合物和未知化合物的快速篩查與鑒定,降低“假陽(yáng)性”出現(xiàn)的概率,并且能在一次檢測(cè)過(guò)程中分析數(shù)百種化合物,可實(shí)現(xiàn)乳中獸藥的準(zhǔn)確定量與篩查。本研究以生乳、UHT乳為研究對(duì)象,采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和飛行時(shí)間質(zhì)譜法,研究了乳中β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及抑制劑等8種目標(biāo)物的同步檢測(cè)技術(shù)條件及其穩(wěn)定性,并對(duì)200個(gè)生乳中的27種獸藥進(jìn)行快速篩查。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定乳中β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及其酶抑制劑的殘留。以乳為研究對(duì)象,以β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素(青霉素V、青霉素G、苯唑西林、鄰氯青霉素、氨芐西林)及抑制劑(克拉維酸鉀、他唑巴坦、舒巴坦)為目標(biāo)物,研究?jī)?yōu)化了前處理?xiàng)l件、色譜條件、質(zhì)譜條件,進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明,試樣采用乙腈提取,正己烷除脂,以0.1%甲酸水-乙腈溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,采用電噴霧(ESI)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描,基質(zhì)校準(zhǔn)外標(biāo)法定量。在0.1~200μg/L范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)r≥0.997;生乳、UHT乳方法檢出限(S/N=3)均為:0.1~5.0μg/kg,定量限(S/N=10)均為:0.5~10.0μg/kg。在低、中、高3個(gè)添加水平下,生乳中8種藥物目標(biāo)化合物的回收率為75.2%~109.5%,RSD為0.20%~4.5%;UHT乳中8種藥物目標(biāo)化合物的回收率為75.7%~108.1%,RSD為0.2%~1.9%。現(xiàn)有方法不能實(shí)現(xiàn)抗生素及其抑制劑的同時(shí)檢測(cè),該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、實(shí)用可行,適用于乳中的β-內(nèi)酰胺抗生素及其抑制劑的測(cè)定。2.β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及其酶抑制劑的穩(wěn)定性。比較了20℃時(shí)不同時(shí)間(0 h、2 h、6 h、10 h、24 h)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素及抑制劑的消解情況。以UHT乳為研究對(duì)象,添加標(biāo)準(zhǔn)品100μL 10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用乳定容至20 mL。取出2 mL放入離心管中,乙腈沉淀蛋白、氮吹、復(fù)溶,上機(jī)濃度為50 ng/mL。連續(xù)測(cè)樣,結(jié)果表明0~10 h內(nèi)各種藥物基本穩(wěn)定,除了克拉維酸會(huì)有4%~6%分解。當(dāng)在室溫20℃放置至24 h時(shí),克拉維酸約10%分解,另外青霉素G、青霉素V、苯唑西林對(duì)比1 h的峰面積也出現(xiàn)不同程度10~20%的損失。建議10 h內(nèi)完成樣品測(cè)定分析,10 h后,藥物代謝損失為10%~20%。3.飛行時(shí)間質(zhì)譜法測(cè)定生乳中27種獸藥殘留。以生乳中磺胺類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素等為目標(biāo)物,研究?jī)?yōu)化了前處理?xiàng)l件、凈化柱的選擇、色譜條件、質(zhì)譜條件。結(jié)果表明,試樣用80%乙腈水提取,經(jīng)Prime HLB小柱凈化、氮吹、覆溶。流動(dòng)相:正離子模式下A為0.1%的甲酸,B為乙腈,梯度洗脫,樣品采集MS~E模式。通過(guò)對(duì)MS、MS/MS數(shù)據(jù)的采集,建立Q-TOF的獸藥數(shù)據(jù)庫(kù)。可用于疑似獸藥化合物的初篩,全掃描碎片離子用于化合物的最終確證。篩查參數(shù)優(yōu)化,所有化合物的質(zhì)量偏差均低于10ppm,可進(jìn)行批量生乳樣品篩查。
【圖文】：

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文HSS T3 柱對(duì)極性較大的小分子化合物有更好保留的特性，見(jiàn)圖 5-b。因此，流動(dòng)相 pH對(duì)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)和分離度均具有較大影響，本試驗(yàn)所用的流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水。張秀堯的研究結(jié)果也表明青霉素藥物以及 β-內(nèi)酰胺酶抑制劑藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)式中含有羧基，在甲醇體系中，易生成青霉噻唑酸甲酯（張秀堯等，2014）。

HSS T3 柱對(duì)極性較大的小分子化合物有更好保留的特性，見(jiàn)圖 5-b。因此，流動(dòng)相 pH對(duì)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)和分離度均具有較大影響，本試驗(yàn)所用的流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水。張秀堯的研究結(jié)果也表明青霉素藥物以及 β-內(nèi)酰胺酶抑制劑藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)式中含有羧基，在甲醇體系中，易生成青霉噻唑酸甲酯（張秀堯等，2014）。圖 4 不同的定容液對(duì)色譜峰形的影響 a 乙腈-0.1%甲酸水，，b乙腈-0.1%甲酸水（80+20）Fig. 4 Effect of different volume liquid ratio on peak shape of chromatography a. 10+90，b. 80+20
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：TS252.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2608800