L-酪氨酸(L-Tyrosine,Tyr)是三大芳香族氨基酸之一,在食品、飼料、醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。由于L-酪氨酸代謝途徑和調(diào)控方式較為復(fù)雜,因此合成效率受到制約。本研究是在實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的一株L-苯丙氨酸生產(chǎn)菌的基礎(chǔ)上對其進(jìn)行分子改造,使其能夠過量積累L-酪氨酸。此外,對菌株培養(yǎng)條件和發(fā)酵過程進(jìn)行優(yōu)化,確定了最佳發(fā)酵條件和補(bǔ)料方式,進(jìn)一步強(qiáng)化大腸桿菌合成酪氨酸的能力。本文主要研究結(jié)果如下:(1)L-酪氨酸重組菌株的構(gòu)建和酪氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的改造。通過連續(xù)傳代消除大腸桿菌(Escherichia coli)WSH-Z06(pAP-B03)菌株的pAP-B03質(zhì)粒,獲得E.coli HGX菌株。構(gòu)建熱誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒pAP-aroG^fbr-tyrA^fbr,轉(zhuǎn)化E.coli HGX菌株獲得了熱誘導(dǎo)型菌株E.coli HGXP,搖瓶發(fā)酵L-酪氨酸產(chǎn)量為3.12 g?L^-1,較E.coli HGX菌株提升了110.8%。在E.coli HGXP菌株的基礎(chǔ)上分別構(gòu)建酪氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)基因敲除菌E.coli HGPP(HGXPΔaroP)和...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1-1L-酪氨酸分子結(jié)構(gòu)

圖1-1L-酪氨酸分子結(jié)構(gòu).1-1ThemolecularstructureofL-tyro業(yè)及醫(yī)藥業(yè)等領(lǐng)域有較大的應(yīng)用表1-1L-酪氨酸的主要用途Table1-1ApplicationsofL-tyrosineL-酪氨酸可用作治(PKU)的營養(yǎng)補(bǔ)充劑L....

圖1-2大腸桿菌中L-酪氨酸合成途徑及調(diào)控方式

前生產(chǎn)L-酪氨酸的菌株主要有谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicu桿菌(Bacillussubtilis)、黃色短桿菌(Brevibacteriumflavum)和大腸桿菌(Esch。代謝工程改造生產(chǎn)L-酪氨酸的進(jìn)展主要集中在大腸桿菌和谷氨酸棒....

圖3-1SDS-PAGE蛋白電泳分析

一株生產(chǎn)L-酪氨酸的大L和tyrC，可以產(chǎn)生43轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)來生產(chǎn)L-酪氨構(gòu)建06(pAP-B03)帶有pAP-B的關(guān)鍵基因。L-苯丙氨菌必須先將pAP-B03消除質(zhì)粒的大腸桿菌菌株入E.coliHGX菌株中S-PAGE蛋白電泳分析[6出現(xiàn)了明顯的蛋白質(zhì)特....

圖3-2E.coliHGX及HGXP菌株搖瓶發(fā)酵結(jié)果

對E.coliHGX和HGXP菌株進(jìn)行了搖瓶發(fā)酵試驗(yàn)。由圖3-2a可知，菌株生物量(OD600)隨時間的推移而增加，菌株E.coliHGX和HGXP的生物量在30h時達(dá)到最高值，最高生物量分別為11.8、11.3，在發(fā)酵過程中兩株菌的最大OD....

本文編號：3892585