能源的巨大消耗以及化石燃料的短缺,使得經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展難以維持,化石燃料的大量使用也帶來了環(huán)境污染等問題。因此找到能夠替代化石燃料的可再生能源是目前亟待解決的問題。脂肪酸因具有高能量密度、與傳統(tǒng)能源匹配度高等特點可以作為一種有效的生物能源,并且可以利用微生物作為細胞工廠進行生產(chǎn)。釀酒酵母作為細胞工廠目前已經(jīng)有了很多方面的應(yīng)用。本課題通過改造釀酒酵母的中線碳代謝途徑以提高其脂肪酸產(chǎn)量。在已敲除部分競爭反應(yīng)途徑及逆反應(yīng)途徑（Faa1,Faa4,Pox1,Hfd1）的脂肪酸生產(chǎn)菌株YJZ08作為背景菌株的基礎(chǔ)上進行進一步的改造。首先我們通過引入外源NADPH合成途徑3-磷酸甘油醛脫氫酶GapN和甘油合成途徑（Gpd1,Gpd2）刪除的方式,調(diào)控細胞內(nèi)的氧化還原平衡;其次引入了兩種外源的胞質(zhì)乙酰輔酶A合成途徑,包括定位在胞質(zhì)的PDH途徑和PK途徑,意圖提高脂肪酸合成前體乙酰輔酶A的生成;同時還考察了與脂類代謝相關(guān)的調(diào)控效果（Pah1,Dpp1,Lpp1,Are1）;最后測試了各種有效策略共同作用的結(jié)果。通過不同策略的代謝途徑改造,經(jīng)外源PDH途徑的引入以及基因Gpd1,Gpd2,PAH1,LP... 

【文章來源】：北京化工大學北京市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 釀酒酵母作為細胞工廠的運用
        1.1.2 脂肪酸代謝
    1.2 提高脂肪酸產(chǎn)量的策略
    1.3 研究進展
    1.4 本課題研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實驗儀器與試劑
    2.2 質(zhì)粒及菌株構(gòu)建
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 酵母菌株的構(gòu)建
    2.3 菌株培養(yǎng)
    2.4 代謝物檢測
3 氧化還原輔因子調(diào)控
    3.1 改造策略的選擇
    3.2 菌株構(gòu)建
    3.3 氧化還原輔因子調(diào)控對脂肪酸產(chǎn)量的影響
    3.4 本章小結(jié)
4 乙酰輔酶A供應(yīng)量調(diào)控
    4.1 外源乙酰輔酶A途徑的選擇
    4.2 菌株構(gòu)建
    4.3 外源乙酰輔酶A途徑對生長的影響
    4.4 外源乙酰輔酶A途徑對生脂肪酸產(chǎn)量的影響
    4.5 本章小結(jié)
5 脂類代謝調(diào)控
    5.1 調(diào)控途徑選擇
    5.2 菌株構(gòu)建
    5.3 脂類代謝調(diào)控對脂肪酸產(chǎn)量的影響
    5.4 PDH對ZS05的影響
    5.5 本章小結(jié)
6 PDH的輔酶特異性改造
    6.1 PDH改造原理
    6.2 菌株構(gòu)建
    6.3 改造后PDH對脂肪酸生產(chǎn)的影響
    6.4 本章小結(jié)
7 其他調(diào)控策略
    7.1 乙酰輔酶A羧化酶上調(diào)
        7.1.1 調(diào)控方法及菌株構(gòu)建
        7.1.2 脂肪酸測試
    7.2 硫酯酶的引入
        7.2.1 調(diào)控方法及菌株構(gòu)建
        7.2.2 脂肪酸測試
    7.3 本章小結(jié)
8 多種策略的綜合調(diào)控
    8.1 菌株構(gòu)建
    8.2 多種策略對菌株生長的共同作用
    8.3 多種策略對脂肪酸生產(chǎn)的共同作用
    8.4 本章小結(jié)
9 總結(jié)與展望
參考文獻
附錄
致謝
作者和導(dǎo)師簡介
附件



本文編號：3627379