林蛙又稱雪蛤,盛產(chǎn)于中國東北長白山地區(qū)。林蛙具有非常高的藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值,這使得它成為經(jīng)濟(jì)蛙中最具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一種。林蛙骨肉中含有豐富的蛋白質(zhì),是良好的蛋白質(zhì)來源。本研究以林蛙骨肉為原材料,首先通過酶法進(jìn)行林蛙骨肉多肽的制備,以水解度和多肽得率為主要指標(biāo),確定林蛙骨肉多肽制備的工藝條件,然后將最佳條件下制備的林蛙骨肉多肽通過超濾、凝膠層析等技術(shù)進(jìn)行分離純化。將凝膠層析得到的五個(gè)組分分別收集、篩選,再用高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,篩選出優(yōu)勢(shì)氨基酸序列。最后將經(jīng)過分離純化得到的林蛙骨肉小肽進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)作用的研究。主要研究結(jié)果如下:1.將預(yù)處理過的林蛙骨肉為原料,以水解度為指標(biāo),分別用木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶在其最適條件下對(duì)林蛙骨肉進(jìn)行蛋白酶解試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)木瓜蛋白酶酶解效果好于其他蛋白酶,其中木瓜蛋白酶水解度為18.31±0.25%。2.利用單因素試驗(yàn)考查了pH、溫度、酶解時(shí)間、加酶量（E/S）對(duì)林蛙骨肉水解度和多肽得率的影響,并以水解度為指標(biāo)進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn),確定了木瓜蛋白酶酶解林蛙骨肉的最佳工藝條件為:pH為7,溫度55℃,酶解時(shí)間4h,加酶量為6%,在... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

工藝路線圖

第2章林蛙骨肉多肽提取工藝研究152.4結(jié)果與討論2.4.1林蛙骨肉基本成分測定結(jié)果林蛙骨肉中蛋白質(zhì)含量為54.65±0.24%、脂肪含量為2.81±0.04%、鈣含量為4.04±0.05%。脫鈣率為62.35±0.18%，脫脂率為44.68%±0.22%。2.4.2酶活力測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：在波長為680nm下檢測吸光值，以酪氨酸的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖所示，其中y=0.0104x-0.0025，R2=0.9995圖2-1標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure2-1Standardcurve根據(jù)酶活力的測定方法，結(jié)合標(biāo)曲可以得到試驗(yàn)結(jié)果如表2-5，可知本試驗(yàn)中木瓜蛋白酶的酶活力高于其他蛋白酶的酶活力，可為后續(xù)林蛙骨肉水解蛋白酶的選擇作參考。表2-5酶活力測定結(jié)果Table2-5DeterminationofEnzymeActivity蛋白酶酶活力（U/mg）胰蛋白酶230中性蛋白酶270堿性蛋白酶320木瓜蛋白酶490胃蛋白酶190

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文162.4.3蛋白酶的選擇在制備林蛙骨肉多肽時(shí)，酶的選擇是關(guān)鍵，不同的水解酶由于其理化性質(zhì)的差異，切割位點(diǎn)不同所得到的產(chǎn)物也會(huì)不同，其功能特性也就不同。本試驗(yàn)選用五種蛋白酶分別水解林蛙骨肉，以水解度為指標(biāo)，考察選擇最適蛋白酶，蛋白酶水解結(jié)果如圖2-2所示，木瓜蛋白酶水解度明顯優(yōu)于其他蛋白酶，水解度為18.31±0.25%。結(jié)果分析得木瓜蛋白酶為水解林蛙骨肉最佳蛋白酶眩圖2-2不同蛋白酶對(duì)水解度的影響Figure2-2Effectofdifferentproteasesonthedegreeofhydrolysis2.4.4蛋白酶水解林蛙骨肉的單因素試驗(yàn)結(jié)果影響酶促反應(yīng)的因素非常多，而且復(fù)雜，這里我們選擇了幾個(gè)常見且影響較大的因素進(jìn)行分析，分別為：pH值、溫度、時(shí)間、加酶量，結(jié)果如下。2.4.4.1不同pH對(duì)提取林蛙骨肉多肽的影響圖2-2不同pH對(duì)水解度和多肽得率的影響Fig.2-2EffectofdifferentpHondegreeofhydrolysisandpeptideyield

【參考文獻(xiàn)】：
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[8]蛋清源ACE抑制肽的結(jié)構(gòu)鑒定及穩(wěn)定性研究[D]. 于志鵬.吉林大學(xué) 2011
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