目的:本文利用基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng)和中壓制備液相聯(lián)用技術高效分離海地瓜多肽中的活性肽,應用化學和生物學活性評價方法對分離得到的每個組分進行降壓、抗氧化和降糖活性研究,為開發(fā)海地瓜活性肽功能食品、特醫(yī)食品和新藥的研究與開發(fā)提供參考。方法:1.海地瓜多肽制備工藝研究（1）以海地瓜為原料,以血管緊張素轉換酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率為評價指標,利用正交實驗,優(yōu)化海地瓜多肽的酶解條件。（2）應用國家標準方法,測定海地瓜的主要營養(yǎng)成分和海地瓜及多肽中氨基酸含量,并根據(jù)氨基酸模式和全雞蛋蛋白模式分別計算海地瓜及多肽的氨基酸評分、化學評分和必需氨基酸指數(shù),評價其營養(yǎng)價值。2.海地瓜活性肽的分離純化（1）以ACE抑制率為評價指標,應用基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng),通過單因素實驗,優(yōu)化海地瓜活性肽分離富集條件。（2）通過色譜條件的優(yōu)化,利用中壓制備液相色譜對海地瓜活性肽的富集部位進行進一步的分離純化。3.海地瓜活性肽的活性研究以ACE抑制能力為指標對海地瓜活性肽不同活性組分的降壓活性進行評價,以自由基清除能力及總抗氧化能力為指標對海地瓜活性肽... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1雙縮脲標準曲線

蘭州大學碩士學位論文海地瓜活性肽的篩選與評價15的微量元素，約占體重的0.15%，鈉主要分布于機體的骨骼、細胞外液及內液，可以保持水代謝平衡、酸堿平衡、血壓正常以及增強神經(jīng)肌肉興奮性。海地瓜的鈉含量高達14.8g/100g，是東海刺參的3倍。海地瓜營養(yǎng)成分含量與東海刺參相近，且具有價格低廉的優(yōu)勢，因此在開發(fā)低價高值的海洋功能性食品方面具有很大的潛力。2.3.2海地瓜多肽蛋白酶的篩選Seung等[71]研究發(fā)現(xiàn)多肽的活性與其氨基酸組成密切相關，因此篩選蛋白酶是制備活性多肽的關鍵步驟。本文選用9種蛋白酶，確定料液比1:8（w/v），加酶量5%（w/w），在其最適條件下酶解4h，各酶解產(chǎn)物的ACE抑制抑制能力見圖2-2。圖2-2不同海地瓜酶解液的ACE抑制能力（±SD，n=3）Fig.2-2ACEinhibitorycapabilityofhydrolysatesofAcaudinamolpadioidesproducedbydifferentproteases(±SD,n=3)由圖2-2可知，9種蛋白酶酶解產(chǎn)物的ACE抑制活性之間存在差異。各蛋白酶酶解產(chǎn)物的ACE抑制率分別為H1（22.08%）、H2（未檢出）、H3（39.14%）、H4（51.18%）、H5（37.33%）、H6（22.94%）、H7（25.32%）、H8（17.59%）、H9（2.65%），以H4的酶解產(chǎn)物ACE抑制率最高。H4為風味蛋白酶，它包含真菌蛋白酶和肽酶，具有內切蛋白酶和外切肽酶兩種活性，將多肽內部或末端酶解為短肽和氨基酸，其酶解度高，并且它的最適pH為中性，酶解過程成本小，易操作。綜合考慮，選擇H4作為制備海地瓜多肽的蛋白酶。2.3.3海地瓜多肽酶解工藝的優(yōu)化確定風味蛋白酶為酶解用酶后，本文以多肽得率（PY）為指標，進一步優(yōu)化酶解工藝，結果見表2-5。

蘭州大學碩士學位論文海地瓜活性肽的篩選與評價22機濾膜過濾，上樣于HPLC。色譜條件為：色譜柱依利特SinoChromODS-BP色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流速為1.0mL/min，檢測波長210nm，進樣量為20μL，柱溫為室溫。通過優(yōu)化流動相比例、洗脫方式、流速等色譜條件，確定HPLC色譜分離條件。將HPLC色譜條件轉化為中壓制備液相色譜條件，通過中壓制備液相對海地瓜活性肽進一步分離純化。3.3結果與討論3.3.1海地瓜活性肽的分離富集1.基于DES的ATPS的相圖圖3-1基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng)相圖Fig.3-1PhasediagramsofDES-basedATPS參照文獻[53]，利用七種DES分別與三種鹽溶液C6H5K3O7、(NH4)2SO4、K2HPO4制備ATPS，結果發(fā)現(xiàn)僅K2HPO4能夠與各DES形成ATPS。以一定濃度的K2HPO4作為鹽相，通過濁點滴定法獲得雙節(jié)點曲線數(shù)據(jù)，繪制相圖，如圖3-1所示。由圖3-1可知，七種DES的相形成能力從高到低依次為：氯化膽堿-尿素（1:2）>氯化膽堿-麥芽糖（1:1）>氯化膽堿-葡萄糖（1:1）>氯化膽堿-1，4-丁二醇（1:2）>氯化膽堿-甘油（1:2）>氯化膽堿-乙二醇（1：2）>氯化膽堿-山梨糖醇（1:1）�；贒ES的ATPS由DES和無機鹽溶液組成，二者是影響相平衡的主要因素。Deng等[81]和Li等[77]將四種無機鹽溶液（(NH4)2SO4、Na2SO4、Na2HPO4、K2HPO4）分別與同一種DES混合制備ATPS，結果發(fā)現(xiàn)僅K2HPO4可以與DES形成ATPS，與本文結果一致。Xu等[82]研究發(fā)現(xiàn)不同的鹽溶液與DES成相能力從高到低依次為：Na2CO3>K2HPO4>NaH2PO4>C6H5Na3O7·3H2O，說明無機鹽的陰離子與水分子之間的相互作用力越強越容易與DES形成ATPS。Zhang等[83]

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3511590