發(fā)布時(shí)間：2021-11-11 15:01

　　基因和蛋白質(zhì)水平上的變異是細(xì)胞表型多樣性的基礎(chǔ),細(xì)胞表型多樣性是菌株進(jìn)化的標(biāo)志�；蚪M重排可以引起基因水平上的多種變異,主要包括基因拷貝數(shù)變異（CNV）和基因組結(jié)構(gòu)變異（SV）。本研究利用合成型釀酒酵母基因組重排技術(shù)（SCRaMbLE）快速實(shí)現(xiàn)單倍體細(xì)胞的表型持續(xù)進(jìn)化,在基因組重排條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上建立了完整的研究流程,使重排尺度和規(guī)模提升到染色體水平。紫色桿菌素（violacein）是在革蘭氏陰性菌中發(fā)現(xiàn)的天然非水溶性的藍(lán)黑色色素,是典型的天然L-色氨酸衍生物,脫氧紫色桿菌素前體為淺綠色是該物質(zhì)合成路徑中的關(guān)鍵中間體。本研究構(gòu)建了脫氧紫色桿菌素前體（prodeoxyviolacein）的生產(chǎn)路徑（vioA,vioB,vioE）,并將其分別整合至含有線形或環(huán)形合成型V號(hào)酵母染色體中,隨后在該兩種菌株中,同時(shí)建立具備精確控制元件的Cre/LoxPsym基因組重排系統(tǒng),初步確定了首輪重排中重排時(shí)間與致死率及優(yōu)勢(shì)表型出現(xiàn)率的關(guān)系,并成功實(shí)施多輪迭代重排,獲得了脫氧紫色桿菌素前體產(chǎn)量持續(xù)提升的優(yōu)勢(shì)菌株,在含有線形或環(huán)形合成型V號(hào)染色體酵母單倍體菌株中,經(jīng)過5輪基因組迭代重排,分別將該次級(jí)代謝產(chǎn)物... 

【文章來源】：天津大學(xué)天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人工基因組重排技術(shù)Figure1-1Theartificialgenomerearrangementtechnology

和功能的匹配關(guān)聯(lián)層面。圖 1-2 展示了本研究中涉及的合成型 V 號(hào)染色體的設(shè)計(jì)合成圖，圖成型 V 號(hào)染色體的環(huán)化設(shè)計(jì)。野生型酵母 V 號(hào)染色體全長(zhǎng) 576,8酵母 V 號(hào)染色體全長(zhǎng) 536,024 bp，將整條染色體精簡(jiǎn)了約 40,850過程中發(fā)生單堿基隨機(jī)突變的位點(diǎn)進(jìn)行了順序修復(fù)，最終獲得一型 V 號(hào)染色體�；蛐偷闹匦聵�(gòu)建并未影響合成型 V 號(hào)菌株的生表明在不同的培養(yǎng)基中，與野生菌株具有相同的生長(zhǎng)狀態(tài)。染色體些發(fā)育異常疾病的原因，可用作相關(guān)疾病的模型。染色體環(huán)化過程 1kb 的端粒區(qū)域，并引入了 Leu2 營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記進(jìn)行正確轉(zhuǎn)化子明，成環(huán)后的合成型 V 號(hào)染色體菌株長(zhǎng)狀態(tài)上與線形合成型 V 染一致，但在酵母生孢拆孢過程中，發(fā)現(xiàn)較低的生孢率和較高的孢建出的雙環(huán)形合成型 V 號(hào)的酵母二倍體比單倍體更為嚴(yán)重，文章數(shù)分裂異常有關(guān)[55]。

合成型 V 號(hào)染色體菌株長(zhǎng)狀態(tài)上與線形合母生孢拆孢過程中，發(fā)現(xiàn)較低的生孢率和較合成型 V 號(hào)的酵母二倍體比單倍體更為嚴(yán)關(guān)[55]。圖 1-2 合成型 V 號(hào)染色體的設(shè)計(jì)合成igure1-2 SynV was designed in silico from native wt

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低能氮離子注入和紫外線復(fù)合誘變選育高產(chǎn)釀酒酵母[J]. 虞龍,姚馳亞,吳曉菲,李玉燕,張娣,虞沐堯.  輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào). 2017(02)
[2]亞硝基胍-60C復(fù)合誘變篩選多黏菌素E高產(chǎn)菌株[J]. 陳勇德,劉軍,徐新星,樓麗君,陳守文.  中國(guó)抗生素雜志. 2013(01)



本文編號(hào)：3489066