目的:通過酶解將海洋軟體動物蛋白轉(zhuǎn)化為功能肽是提高其利用效率的有效途徑。但由于海洋軟體動物蛋白結(jié)構(gòu)龐大復(fù)雜,多以糖蛋白形式存在,水解位點(diǎn)被糖基側(cè)鏈屏蔽,難以在溫和條件下水解成功能域結(jié)構(gòu)完整的功能肽。實(shí)驗(yàn)室前期針對此共性問題對產(chǎn)酶海洋微生物開展篩選和研究。發(fā)現(xiàn)了海洋來源的芽孢桿菌SCSIO 06063發(fā)酵所產(chǎn)的胞外蛋白酶在溫和條件下酶解扇貝蛋白,產(chǎn)物具有顯著抗氧化性,表現(xiàn)了良好的應(yīng)用潛力。本研究在此基礎(chǔ)上,對SCSIO 06063的產(chǎn)酶發(fā)酵進(jìn)行優(yōu)化,探索規(guī)�；苽銼CSIO 06063蛋白酶的最優(yōu)條件,并且深入研究其催化酶解扇貝蛋白的產(chǎn)物,明確其中抗氧化有效成分,為形成完整的新酶應(yīng)用技術(shù)奠定基礎(chǔ)。方法:1、發(fā)酵條件的優(yōu)化:以蛋白酶活為檢測目標(biāo),優(yōu)化海洋芽孢桿菌SCSIO 06063產(chǎn)蛋白酶的培養(yǎng)條件。利用單因素法,在LB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,優(yōu)化碳源、氮源、金屬離子和鹽度。考察溫度、初始PH、接種量、轉(zhuǎn)速對發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。采用響應(yīng)面法對影響產(chǎn)酶的主要因素進(jìn)行優(yōu)化,并在最佳優(yōu)化條件下制備酶溶液和扇貝酶解液。2、扇貝SCSIO 06063酶解液中抗氧化肽的研究:以DPPH及OH自由基清除率評價抗氧... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１．蛋白酶酶活測定標(biāo)準(zhǔn)曲線??

２．３．１標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制??不同濃度的酪氨酸溶液經(jīng)稀釋后，對稀釋液按蛋白酶酶活測定方法進(jìn)行類似??處理，并測定吸光值，得到如下蛋白酶酶活標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見圖２－１。??０．４５?１??〇４?－?ｙ＝０．Ｏ０Ｓ８ｘ＋Ｏ．Ｏ３Ｍ＞??Ｒ２＝０Ｓ９９＞＾??ａ?０．３ｊ??〇?０．２５??０２＇??０．１５?－＊??０．１??〇－＾５??〇?１?；?！?＇?；?；?ｉ??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?Ｕｇ／ｍｌ??圖２－１．蛋白酶酶活測定標(biāo)準(zhǔn)曲線??本實(shí)驗(yàn)設(shè)置了不同梯度濃度（０、２０、４０、６０、８０、１００ｕｇ／ｍｌ）酪氨酸溶液，??測定不同濃度的酪氨酸溶液與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線。用以計(jì)算酶解酪蛋白產(chǎn)生??的酪氨酸含量，進(jìn)而計(jì)算酶溶液的酶活力。??２．３．２碳源對菌株ＳＣＳＩ?００６０６３產(chǎn)＿活力的影響??１：?Ｉ??５?，〇＝：?＿??１幽圓＿＿＿??甘露醇麥芽耱果糖?茛糖?甘油葡萄耱??圖２－２．不同碳源對產(chǎn)蛋白酶活力的影響??８??

但由于微生物的種類特點(diǎn)不同，導(dǎo)致不同微生物所適合的碳源也不相同。＇實(shí)??驗(yàn)考察了在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加甘露醇、麥芽糖、果糖、蔗糖、甘油、葡萄糖??后發(fā)酵液酶活的變化。結(jié)果如圖２－２所示，加入麥芽糖后，相對酶活達(dá)到最高，??為?１９６％。??２．?３．?３氮源對菌株ＳＣＳ丨００６０６３產(chǎn)酶的影響??２５０－１??Ｉ：?■??Ｂ：ｌ?＿?Ｉ?議??ＨＨＳＣ１?酵母紛?尿麥甘ｉ？酸??圖２－３．不同氮源對產(chǎn)蛋白酶活力的影響??氮源對微生物生長代謝有重要的影響，構(gòu)成代謝產(chǎn)物的組成部分，如酶，氨??基酸等活性物質(zhì)。由圖２－３可知菌株ＳＣＳＩ００６０６３在以尿素作為氮源時蛋白酶相??對酶活最高，為２０８．５％，其次是甘氨酸，而在以ＮＨＣＵ、酵母粉為氮源時的酶??活力比較低，因此在幾種常見氮源中，選擇尿素作為發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源是最合適??的。??９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]櫛孔扇貝裙邊酶解物美拉德反應(yīng)產(chǎn)物特性研究[D]. 孫世廣.大連工業(yè)大學(xué) 2016
[2]菠蘿蛋白酶酶解海灣扇貝裙邊制備抗氧化肽的研究[D]. 李榮喬.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3434887